fengjh基因工程的原理概要.ppt

被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 SmaⅠ 平末端　　　平末端 如何切割DNA分子呢？ DNA分子 磷酸二酯键 切割DNA分子实质是断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间 的磷酸二酯键 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 A A T T G C C T T A A G 磷酸二酯键 磷酸二酯键 DNA复制 思考： DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？ DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用对象不同 是否需要模板 都是形成磷酸二酯键 连接两个双链 DNA片段的 末端， 将单个核苷酸加到 已有的单链核苷酸 片段的末端 不需要摸板 需要摸板 　　要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 三、基因进入受体细胞的载体—“分子运输车” ⒈运载体具备的特点： 　　⑴多种限制酶酶切位点 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶能在受体细胞中复制并稳定地保存 　　⑷有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒有多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ ⑴细菌的质粒（最常用） 　 ⑵噬菌体或某些动植物病毒 最常用的载体：质粒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 练习 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 2.基因工程常用的受体细胞有（ ） （1）大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） A B 3.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 4、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A．限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B．EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 练习 5、DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确 c 3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( ) A．能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B．具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D．能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 A 6.以下说法正确的是 A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键 C 比较几种酶的作用 断开的化学键 结果 限制性内切酶 DNA酶 DNA解旋酶 特定位置的磷酸二酯键 碱基对 之间的氢键 脱氧核苷酸 DNA片段 特定末端 DNA单链 全部的磷酸二酯键 谢谢! 4.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 练习 普通玫瑰 蓝色妖姬 第一