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- 2016-11-19 发布于山西
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实验八 重金属
实验八 重金属离子胁迫下植物组织膜脂过氧化产物的测定 ——(MDA法) 一,实验目的与要求 掌握比色法测定植物组织MDA含量的方法和步骤; 观察重金属胁迫下植物组织膜脂过氧化的程度。 二,实验原理 MDA是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产物之一。 逆境胁迫导致自由基(O ·2 、OH ?等)积累,诱导细胞膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化反应。 MDA的积累加剧对细胞的伤害。 MDA可与蛋白质、核酸等结合使之失去其活性, 从而进一步破坏了生物膜及细胞内物质的结构与功能, 最终导致植物受伤害, 甚至死亡。 在酸性和高温条件下,MDA可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲氚,在532nm处有最大光吸收。 排除干扰: 蔗糖与TBA反应后,在450nm有最大光吸收,在532nm也有光吸收,通过公式排除干扰。 三,实验材料与试剂 材料 Cd 2+处理7d的菹草叶片; 试剂 10%三氯乙酸(TCA); 0.6%硫代巴比妥酸(TBA)。 四,实验步骤 MDA的提取: 0.1g植物叶片洗净、擦干、剪碎,置于研钵中加少许石英砂、5mLTCA(分次),研磨匀浆后转移至离心管。4000 rpm离心10min,上清液即为样品提取液。 2,显色反应与测定 2mL提取液
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