第六章酶化学技术报告.pptVIP

台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省 第一节 概述 一、酶的概念 二、酶的催化特性 三、酶的组成及分类 第二节酶的结构与功能的关系 一、酶的一级结构与催化功能的关系 二、酶的活性与其高级结构的关系 第三节酶催化反应的机制 一、酶促反应的本质 二、酶反应机制 一、酶促反应的本质 1 ．酶是催化剂― 只影响反应速率而不改变反应平衡点 2 ．加速反应的本质― 降低活化能 3 ．中间产物学说― 酶的工作方式 以酰基转移反应为例来说明共价催化的原理。这类酶的亲核基团首先与含酰基的底物以共价键结合，形成酰化酶中间产物，接着酰基从中间产物转移到另一酰基受体（醇或水）分子中。如含亲核基团的酶（E ）催化的反应（R 为酰基）: 第四节 酶促反应动力学 一、酶促反应的基本动力学 二、酶浓度对酶反应速率的影响 三、温度对酶反应速率的影响 四、pH 值对酶反应速率的影响 五、激活剂对酶反应速率的影响 六、抑制剂对酶反应速率的影响  一、酶促反应的基本动力学  1 ．底物浓度的影响― 底物浓度对酶促反应速率的影响是非线性的 2 ．米氏方程― 定量表达底物浓度与酶反应速率的关系 米氏方程 vmax为最大反应速率； cs为底物浓度； Km为米氏常数； v为cs不足以产生最大速率vmax时的反应速率。 中间产物 米氏方程式推导过程： ES的生成速率 = ES的分解速率 ①双倒数作图法，又称为 林-贝氏作图法 二、酶浓度对反应速率的影响 在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。 温度对淀粉酶活性的影响 最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。 ②非竞争性抑制作用： 有些抑制剂与酶活性中心外的必需基团相结合，不影响酶与底物的结合，酶和底物的结合也不影响酶与抑制剂的结合。底物和抑制剂之间无竞争关系。但酶-底物-抑制剂复合物(ESI)不能进一步释放出产物。这种抑制作用称作非竞争性抑制作用。 非竞争性抑制作用反应模式 ③反竞争性抑制作用： 抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES)结合，使中间产物ES的量下降。这样，既减少从中间产物转化为产物的量，也同时减少从中间产物解离出游离酶和底物的量。这种抑制作用称为反竞争性抑制作用。 反竞争性抑制作用反应模式 第五节 酶的制备 一、酶的制备及纯化 二、酶活性的测定 第六节 酶的多样性 一、共价修饰酶（调节酶） 二、别（变）构酶 第七节酶在工业上的应用及酶工程 一、酶的应用 二、酶的固定化 四、pH值对酶反应速率的影响 1.最适pH 2.pH稳定性 表现出酶最大活力的pH值 在一定的pH范围内酶是稳定的 pH对酶作用的影响机制： 1.环境过酸、过碱使酶变性失活； 2.影响酶活性基团的解离； 3.影响底物的解离。 pH v 最适pH pH对某些酶活性的影响 ★虽然大部分酶的pH-酶活曲线是钟形，但也有半钟形甚至直线形。 五、激活剂对酶反应速率的影响 凡能提高酶的活性，加速酶促反应进行的物质都称激活剂或活化剂。如某些金属离子 酶的激活与酶原的激活有什么不同？？ 六、抑制剂对酶反应速率的影响 1、抑制作用---不同于失活作用和去激活作用 1）抑制作用: 酶的必需基团的性质受到某种化学物质的影响而改变，导致酶活性的降低或丧失，但酶蛋白一般没有变性。 2）失活作用: 酶受到物理或化学因素的影响，使酶活性降低或丧失，是酶蛋白变性的结果。 3）去激活作用: 某些酶只有在金属离子存在下才能很好地表现其活性，如果这些金属离子被去除，则酶活性降低或丧失。 1）不可逆的抑制作用 抑制剂与酶的结合是不可逆反应。无法用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 抑制剂（I）：使酶的必需基团或活性部位中的基团的化学性质改变而降低酶活力甚至使酶失活的物质。 S + E ES E + P + I ↓ EI E—SH +ICH2COOH →E—S—CH2COOH + HI 2、抑制作用的类型 2）可逆的抑制作用---竞争性和非竞争性 抑制剂与酶蛋白非共价键结合，为可逆反应,可以用透折、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 ①竞争性抑制作用：有些抑制剂具有与底物类似的结构，因此抑制剂和底物竞争与酶结合，当抑制剂与酶结合形成可逆的EI复合物，妨碍了底物与酶的结合，减少了酶的作用机会，因而降低了酶的活力。 可以通过增加底物浓