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Chapter 6 DNA recombination Contents: 1、同源重组 2、位点特异性重组 3、DNA的转座 第一节 同源重组 一、概述： 1、定义： 两个DNA分子同源序列之间进行的重组 2、条件： （1）两个DNA分子有同源序列 （2）两个DNA分子必须紧密接触 3、发生： 真核生物: 非姐妹染色单体交换相对应的区域。 原核生物: 依赖recA蛋白，并形成 Holliday 结构 Holiday模型（1964年） 二、Holiday重组模型 1、两个同源DNA分子排列在一起； 2、两个同源DNA分子各有一条链断裂 3、游离端交叉连接，形成Holliday 结构 4、通过分支迁移产生异源双链DNA 5、空间重排和解离 . 6、垂直切割导致重组发生 ? 7、水平切割不会导致重组，而产生两段短的杂合链 三、细菌的同源重组 1、参与细菌的同源重组的因子 （1） RecA: 包裹单链DNA; 促进单链吸收 （2） RecBCD复合体 （3）RuvAB 复合体：促进分支迁移 （4）RuvC：使 Holliday结构解离 （5）SSB （6）Ligase: 封闭切口 （1）RecA: 促进单链同化或单链吸收? 单链同化发生的三个条件 其中一个DNA必须存在单链区 其中一个DNA必须有一个自由3’末端 此单链区和3’末端必须位于两分子之间互补的区域内 RecA 包裹的ssDNA 入侵双螺旋DNA （2）RecBCD 复合体 三种酶的活性： 核酸酶；解旋酶；ATPase 作用： 在Chi位点处产生含3’游离未端单链. Chi位点---RecBCD识别的靶位点 5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5 是重组频率较高的部位 E.coli中每隔约5~10 kb有一个拷贝 （3）RuvAB 复合体: 促进分支迁移 RuvA：识别 Holliday 结构 RuvB：解旋酶（具有 ATP酶活性）  （4）RuvC：切割结构 2、细菌DNA同源重组的过程 (a)通过RecBCD复合体的作用在Chi位点产生切口； (b) ssDNA被recA包裹形成recA-ssDNA细丝 (c) RecA-ssDNA 细丝入侵双螺旋DNA (d) RecA帮助入侵单链寻找同源序列. (e) 切割; 单链交换 (f) 连接酶封闭切口, 产生 Holliday 结构 (g) 在RuvA 和RuvB 作用下发生分支迁移. (h) RuvC 使Holliday结构解离 第二节 位点特异性重组 一、定义： 不依赖于DNA顺序的同源性，而依赖于能与某些酶相结合的特异的DNA序列的存在。 二、噬菌体λ对E.coli DNA的整合 （一）λDNA存在两种形式 裂解状态 溶源状态 （二）通过位点特异性重组实现两种类型间的转换 λDNA整合到宿主DNA →进入溶源状态 λDNA从宿主DNA 中切离 →进入裂解状态 （三）催化重组的酶 1、整合酶 Int (integrase)：类似拓扑异构酶活性 2、整合宿主因子（IHF，integration host factor ） 3、切除酶（excisionase） （四）重组位点： 附着位点（attachment site） attP（ POP’）和attB（ BOB’）有15bp核心序列配对 （五）重组过程： 整合：POP’ + BOB’ →BOP’—POB’ 切离：BOP’—POB’ → POP’ + BOB’ 第三节 转座 一、转座子的概念： 基因组中可转移座位的一段DNA序列 转座：一个转座子由基因组的一个位置转移到 另一个位置的过程 二、转座子发现： McClintock B： 1938年，提出转座基因概念 1944-1950，阐明“Ds-Ac调控系统” 1983年，获诺贝尔生理医学奖 三、转座子的基本结构特点 1、自身携带有转座酶基因 2、末端有反向重复序列（IR） 3、转座后两端有正向重复序列（DR） 2、Tn （复合转座子, composite transposons） 特点： （1） 2-10kb;; （