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胶体金快速检测卡的研制及应用 主要内容 1.胶体金的结构及性质 1.1胶体金的概念 胶体金：指的是粒径在1～100nm之间能够均匀、稳定地、分散在液体中的金纳米颗粒，因其水溶液呈胶体状，因此称之为胶体金溶液。 1.胶体金的结构及性质 1.2胶体金的结构 胶体金是由一个基础金原子核与包围在外层的负离子层（AuCl2-）构成，呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)。胶体金颗粒最外层可以吸附大量的正离子，能够均匀的分散在溶液中。 1.胶体金的结构及性质 1.3胶体金的性质 （1）外观：随着胶体金粒径的逐渐增大，胶体金溶液的颜色从橙色逐渐变为紫色。 2.胶体金的制备 2.1制备方法（还原法）：采用还原剂将氯金酸（HAuC14）还原成胶体金，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。 2.胶体金的制备 2.2注意事项： （1）玻璃器皿的清洁 制金前，玻璃器皿先用王水或铬酸溶液浸泡24小时，用自来水冲洗干净，然后依次用清洁剂洗涤3次，自来水冲洗3次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗3次。 2.胶体金的制备 （2）试剂的配制 制备胶体金需要配制的氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液必需使用双蒸水。 氯金酸溶液可以存放在4℃冰箱中，保存1年左右。 还原剂柠檬酸三钠溶液需要新鲜配制。 3.胶体金检测卡的组成 3.1结构：主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜（NC膜），吸水垫4个部分组成，从下至上依次首尾互相衔接，粘贴在PVC底板上。 3.胶体金检测卡的组成 3.2作用： ⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对检测结果的干扰。 ⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上，是追踪抗体与抗原的反应。 ⑶硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结果。 ⑷吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生反应。 3.胶体金检测卡的组成 3.胶体金检测卡的组成 3.3制作过程 （1）胶体金的制备 将氯金酸加热煮沸，用柠檬酸三钠还原制成粒径约为40nm酒红色的胶体金溶液。 3.胶体金检测卡的组成 （2）胶体金的标记 3.胶体金检测卡的组成 （3）金垫制备 将标记好的金标复合物喷涂在玻璃纤维素膜上，在干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 （4）样品垫制备 将样品垫处理液浸涂在玻璃纤维素膜上，在干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 3.胶体金检测卡的组成 （5）印膜制备 将硝酸纤维素膜（NC膜）贴在PVC底板上，将印膜机的C,T线调整到合适的距离，然后进行印膜，最后将印好的膜放在干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 3.胶体金检测卡的组成 （6）组板 将吸水垫和制备好的金垫、样品垫裁切至合适的宽度，与印好C,T线的硝酸纤维素膜贴在PVC板相应的位置。 3.胶体金检测卡的组成 （7）切条 根据检测卡卡槽的宽度，将组装好的大板裁切成一定宽度的检测条，裁切宽度均一，无压痕，无划伤。 3.胶体金检测卡的组成 （8）包装 将裁切好的检测条压入检测卡壳内，配上吸管和干燥剂装入铝箔袋内，并密封好，按照一定的规格装入包装盒内。 4.胶体金检测卡的原理 4.胶体金检测卡的原理 4.1竞争法 预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C）分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样滴加在样品垫上，当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗（Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条紫红色条带。 结果判定： 4.胶体金检测卡的原理 4.2夹心法 预先在硝酸纤维素膜的检测线（T）上和质控线（C）分别包被上犬细小抗体和羊抗鼠二抗，将胶体金标记的犬细小免疫鼠抗体固着在玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测样本加入加样孔内，由于层析的原理向上移动，当遇上干燥的金标复合物，将其溶解，并带着金标复合物继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有犬细小病毒抗原存在，包被在检测线上的犬细小抗体和胶体金标记的犬细小抗体与样品中的犬细小病毒抗原将会在