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Genetic recombination and genetic engineering基因重组和基因工程 1. 自然界的基因转移和重组 接合作用（conjugation） 转化作用（transformation） 转导作用（transduction） 转座（transposition） 基因重组（gene recombination） 接合作用（conjugation） 当细菌与细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细菌转移到另一个细菌，这种DNA转移称为接合作用。 质粒：细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。 转化作用（transformation） 通过自动获取或人为地供给外源DNA，使受体细胞获得新的遗传表型。 例如：溶菌时，裂解的DNA片断作为外源DNA被另一细菌摄取，通过重组整合进基因组，受体菌就会获得新的遗传性状。 Avery the discovery of DNA as genetic material 转导作用（transduction） 通过噬菌体将基因从一个细菌转移到另一个细菌的过程。 转座（transposition） 基因组中可移动的DNA序列包括插入序列（insertion sequences, IS）和转座子（transposons）。 由插入序列或转座子介导的基因转移或基因重排称为转座。 基因重组（gene recombination） 在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接作用。 可分为： 同源重组（homologous recombination）： 发生在同源序列间的重组称为同源重组，又 称基本重组。 位点特异性重组（sitespecific recombination）： 由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。 2. 重组DNA 技术 Recombinant DNA technology 2.1 重组DNA技术相关概念 2.1.1 DNA克隆（DNA cloning） 克隆（clone）：来源于同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化（cloning）：获取同一拷贝集合的过程，即无性繁殖。 从不同水平有：分子克隆，即DNA 克隆 细胞克隆 个体克隆（动物或植物） DNA克隆（DNA cloning） 应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成为一个具有自我复制能力的DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子。 也称基因克隆或重组DNA（recombinant DNA）。 基因工程—实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为基因工程（genetic engineering），又称重组DNA技术（recombinant DNA technology）。 基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程、生物医学工程、生物信息工程成为现代生物技术工程的主要支柱。 2.1.2 工具酶 Ⅱ型限制性内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶Ⅰ 反转录酶 多聚核苷酸激酶 末端转移酶 外切酶Ⅲ 碱性磷酸酶… 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease, RE） 定义：识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统，限制外源DNA，保护自身DNA。 分类：Ⅰ、Ⅱ（重组DNA技术常用）、Ⅲ 2.2 重组DNA技术的基本原理 目的基因的获取 克隆载体的选择和构建 目的基因与载体的连接 重组DNA导入受体细胞 重组体的筛选 克隆基因的表达 目的基因的获取 化学合成法 基因组文库筛选法 cDNA文库筛选法 聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction, PCR） 聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction, PCR） by Kary Mullis in 1983. simple, specific and potent. template DNA, primers, TaqE, dNTP etc. 基