四 沉淀技术.pptVIP

图16-10表示大豆蛋白的溶解度随pH的变化情况。 等电点沉淀法 等电点沉淀法注意事项 本法适用于憎水性较强的蛋白质，例如酪蛋白在等电点时能形成粗大的凝聚物。 但对一些亲水性强的蛋白质。如明胶，则在低离子强度的溶液中，调 pH在等电点并不产生沉淀。 等电点沉淀法往往不能获得高的回收率，通常与其他沉淀方法结合使用: 在调节等电点时，如果采用盐 酸、氢氧化钠等强酸强碱，要注意防止酶的失活或蛋白变性。为了使pH缓慢变动，也可用乙酸、碳酸等弱酸和碳酸钠等弱碱。 中性盐浓度增大时，等电点向偏酸方向移动，同时最低溶解度会有所增大。 有机溶剂沉淀法organic sovent precipitation 概念：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。 有机溶剂对于许多蛋白质（酶）、核酸、多糖和小分子生化物质都能发生沉淀作用，是较早使用的沉淀方法之一。 优点：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白阿质等只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易； 缺点:1）对具有生物活性的大分子容易引起变性失活，2）操作要求在低温下进行。3）成本高 总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法机理 A 降低溶剂介电常数（介电常数D有机 D水） ，减小溶剂的极性，从而削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的