第四章植物胚胎培养及离体授粉解析.pptVIP

一、胚培养的意义（应用） 1. 促使发育不良和中途败育的胚发育成熟（胚抢救） 高等植物的种间和属间进行远缘杂交时， 由胚乳发育不良使杂种胚的败育。 可以建立胚胎培养， 在人工培养基上供应与胚乳成分类似的外源营养，以保证胚的正常发育。 2. 打破休眠期促使萌发 胚培养可以克服种子发育上的障碍和促进胚的生长， 提高发芽率、缩短育种周期或加速良种繁育。 3. 克服多胚品种珠心胚的干扰 仙人掌、柑橘等，除正常有性胚外，还配以从珠心组织发生多个不定胚。 这些不定胚常常侵入胚囊，使合子胚发育受阻，影响了育种效率。 4. 快速繁殖良种砧木 可以产生大量的次生胚，加速良种砧木的繁殖； 而且胚胎发生技术是人工种子的重要基础。 5. 诱导胚性愈伤组织 利用幼胚或胚轴，珠心组织等外植体，培养产生胚性愈伤组织， 为细胞悬浮培养、原生质体分离、融合，或遗传转化提供很好的材料。 此外，通过胚胎培养， 探讨胚胎发育的机制、 开展人工受精、 以及胚与胚乳的相互关系 等基础研究。 3. 种胚培养的外界条件 光照：黑暗。 温度：25℃温度较适， 但有些材料的生长需要较高的温度， 如热带兰花的杂交种胚的培养，适于30℃温度； 具有休眠习性的植物种胚， 接种后先在4℃温度下，培养一段时间，然后转入正常温度培养。 固体培养 （1）生长调节剂 生长素与细胞分裂素合理搭配，才能控制胚性生长，促使胚发育成熟。 添加生长调节剂不当，可能改变胚胎发育的方向， 转向脱分化而形成愈伤组织， 或引发早熟萌发。 （2）其他物质 氨基酸：谷氨酰胺等； 维生素：必需。硫胺素、烟酸、泛酸等； 附加物：椰乳、香蕉、酵母提取物等天然有机物或活性炭。 1.胚乳外植体的制备 1）胚乳较大块组织的种子，如大戟科和檀香科的植物， 可直接将种子表面灭菌，无菌条件下除去种皮即可培养。 2）带果实的种子（斛寄生类）， 取授粉几天后的幼果，表面灭菌后，无菌条件下切开幼果， 取出种子，小心分离出胚乳，接种在培养基上。 （1）愈伤组织诱导 除少数寄生或半寄生植物可直接从胚乳中分化出器官， 大部分被子植物的胚乳，无论是未成熟的或成熟的， 都需要经历愈伤组织阶段，才能分化植株。 胚乳接种后的6-10天后，不断增生成乳白色团状，成为愈伤组织。 生长旺盛的愈伤组织应及时进行分化培养，此时需光。 胚乳愈伤组织诱导器官的形成也可通过 器官发生和胚胎发生 2种途径来实现。 通过胚胎发生途径获得再生植株，最早的是柑橘。 通过胚胎发生途径获得再生植株的植物有 檀香、橙、桃、枣、核桃和猕猴桃等。 胚乳愈伤组织及再生植株的染色体数常常发生变化。 如苹果（2n=34）胚乳植株根尖细胞染色体数的分布范围是 29-56条，多数是37-56条，3倍体细胞只占2%-3%。 同一植株是不同倍性细胞的嵌合体。 染色体倍性混乱在胚乳培养中是相当普遍的。 但有些植株胚乳培养，如核桃、檀香、橙和柚等， 其倍性表现出相对的稳定性， 这些植物的胚乳细胞往往也能长期保持器官的分化能力。 胚乳植株染色体数目的检查 取胚乳培养植株根尖、幼叶或胚乳愈伤组织， 0.2-0.5%秋水仙素（或对二氯苯饱和溶液）25℃下处理4-8h， 流水冲洗， 卡洛氏液或FAA固定（福尔马林-酒精-醋酸混合固定液）， 1mol盐酸，60℃水浴下，水解10min， 染色（1%醋酸洋红，3-5min）、 压片（加1滴45%醋酸）、 观察。 胚乳的类型、 胚乳愈伤组织发生的部位、 培养基中外源激素的种类和水平。 如猕猴桃来源于同一植株的胚乳， 可以培养出三倍体和二倍体两种倍性的植株。 ZT 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L，愈伤组织再生2倍体植株； ZT 3.0mg/L+2,4-D 1mg/L，愈伤组织再生3倍体植株； 1.培养基与培养条件 （1）培养基 在胚乳培养中，常用的基本培养基有White、LS、MS、MT等， 其中以MS使用最多。 生长调节剂：2,4-D、玉米素等； 天然提取物：20%番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰乳