第四章+原核基因表达调控解析.ppt

基因的表达与调控(上) ——原核基因表达调控模式 基因表达调控基本概念和特征 乳糖操纵子 色氨酸操纵子 半乳糖操纵子 阿拉伯糖操纵元 原核基因调控的其他机制 第一节 基因表达调控的基本概念和特征 3、基因表达的方式 组成性表达(constitutive expression) 适应性表达(adaptive expression） 4、基因表达的调控因子： 5、基因表达的调控水平 原核生物基因表达的特点 第二节 乳糖操纵子 内容提要： 操纵子学说的基本概念 乳糖操纵子的结构 酶的诱导——lac体系受调控的证据 乳糖操纵子调控模型 影响因子 Lac操纵子中的其他问题 2、操纵子的定义 　根据操纵子对调节蛋白（阻遏蛋白或激活蛋白）的应答，可分为：正转录调控和 负转录调控 可诱导调节：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。 例：大肠杆菌的乳糖操纵子 可阻遏调节：基因平时是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。 例：色氨酸操纵子 酶合成的阻遏操纵子模型 二、乳糖操纵子的结构 Z编码β-半乳糖苷酶：将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖 Y编码β-半乳糖苷透过酶：使外界的β-半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。 A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基转到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。 三，酶的诱导——lac体系受调控的证据 安慰诱导物： 如果某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为安慰诱导物，如IPTG（异丙基-β–D-硫代半乳糖苷）。 四、乳糖操纵子调控模型 主要内容： ① Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码 ② 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P），不能单独启动合成β-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。 ③ 操纵基因是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。 ④当阻遏物与操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。 ⑤诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。 五、影响因子 1、lac操纵子的本底水平表达 有两个矛盾是操纵子理论所不能解释的： ①诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合，而转运诱导物需要透过酶，后者的合成有需要诱导。 ②真正的诱导物是异构乳糖而非乳糖，前者是在β-半乳糖甘酶的催化下由乳糖形成的，因此，需要有β-半乳糖甘酶的预先存在。 解释： 本底水平的组成型合成：非诱导状态下有少量的lac mRNA合成。 2、大肠杆菌对乳糖的反应 培养基：甘油 按照lac操纵子本底水平的表达，每个细胞内有几个分子的β-半乳糖苷酶和β-半乳糖苷透过酶； 培养基：加入乳糖 少量乳糖 诱导物的加入和去除对lac mRNA的影响 3、阻遏物lac I基因产物及功能 Lac 操纵子阻遏物mRNA是由弱启动子控制下组成型合成的，每个细胞中有5-10个阻遏物分子。 当I基因由弱启动子突变成强启动子，细胞内就不可能产生足够的诱导物来克服阻遏状态，整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。 4、葡萄糖对lac操纵子的影响 如果将葡萄糖和乳糖同时加入培养基中， lac操纵子处于阻遏状态，不能被诱导；一旦耗尽外源葡萄糖，乳糖就会诱导lac操纵子表达分解乳糖所需的三种酶。 5、cAMP与受体蛋白 腺苷酸环化酶将ATP转变为cAMP, cAMP与其受体蛋白结合,形成cAMP—CAP复合物, 当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能发挥作用 第三节 色氨酸操纵子（trp operon） 内容提要： 色氨酸操纵子的结构 色氨酸操纵子的阻遏系统 色氨酸操纵子的弱化机制 　　　　　色氨酸操纵子特点: (1) trpR和trpABCDE不连锁； (2) 操纵基因在启动子内 (3) 有衰减子(attenuator)/弱化子 (4) 启动子和结构基因不直接相连，二者被 前导序列(Leader)所隔开 1、弱化子：在trp操纵子的DNA中，可导致转录过早终止的一段核苷酸序列。 引起终止的mRNA碱基序列，发现该区mRNA通过自我配对可以形成茎-环结构，有典型的终止子特点。 2、前导序列：在trp mRNA5’端trpE基因的起始密码前一个长162bp的mRNA片段，把此片段叫做前导序列