泛素—蛋白酶途径降解蛋白质与疾病解析.pptVIP

泛素—蛋白酶途径(UPP)降解蛋白质与疾病 主讲人： 哺乳动物细胞中蛋白质的降解 异常蛋白 短周期蛋白 内质网相关蛋白 长周期蛋白 膜蛋白 细胞外蛋白 泛素-蛋白酶体途径 溶酶体途径 氨基酸小肽 80-90% 10-20% 目录 UPP的构成 UPP的作用机制 UPP与疾病 问题与展望 泛素调节的蛋白质降解概述 蛋白质的降解是一个精细控制的过程，首先有待降解的蛋白质被一种多肽（称之为泛素）所标记，接着这些蛋白质进入细胞的蛋白酶复合体中，蛋白酶复合体是一个上下有盖的圆桶状酵素，它们如同细胞的垃圾桶，专门负责蛋白质的分解及再循环利用，泛素在这一过程中释出讯号，让蛋白酶复合体分辨出有待降解的蛋白质。 泛素-蛋白酶体途径（UPP）的构成： 主要包括 泛素( ubiquitin, Ub)、 泛素活化酶( ubiquitin-activatingenzyme, E1)、 泛素连接酶( ubiquitin-conjugatingenzyme, E2)、泛素蛋白连接酶( ubiquitin-protein ligating enzyme,E3)、 26S蛋白酶体 去泛素化酶( deubiquitinating enzyme, DUBs)等。 蛋白酶体结构 26S 蛋白酶体包括2个19S调控蛋白和一个20S核心蛋白 20S 蛋白酶体至少有三种不同的蛋白酶活性 已知的20S 蛋白酶体蛋白酶活性至少有三种，催化位点均位于β亚基上，分别是： 类糜蛋白酶活性（β5）， 类胰蛋白酶活性（β2）， 肽-谷氨酰肽水解酶活性（β1） 泛素 泛素由76个aa组成，广泛存在于真核生物，不同来源的泛素蛋白具有类似的结构、功能和免疫学特征，其空间结构如图1所示。其功能位点为C-末端76Gly残基和Lys残基，76Gly残基能与E1、E2、E3以共价键相互作用。泛素是UPP的重要组成部分，激活后识别、 标记靶蛋白。 泛素活化酶 泛素活化酶（E1）在细胞中含量丰富，为细胞生存和活性所需，在进化中很保守; 可能是由两个分子量为105KD亚基组成的二聚体; 目前，在哺乳动物中发现一种有活性的泛素活化酶; 其主要功能是激活泛素。 泛素结合酶 目前有50 种泛素结合酶（E2）被发现，其中酵母中13 种，哺乳动物中有20 多种，由此推测E2 的多样性与靶蛋白泛素化特异性有关; 多数E2为小分子量蛋白，其共性是有14－16KD 核心区域，核心区域内含有维持其活性所需的半胱氨酸残基；其主要功能是把泛素连接到靶蛋白或E3上。 泛素连接酶 泛素连接酶（E3）可识别靶蛋白中特异性模体，并催化泛素与E2脱离而与靶蛋白结合，目前已发现数百种E3，其多样性表明整个系统中的底物特异性。因为在选择底物的过程中，E3起关键作用，它直接或间接通过辅助蛋白与底物发生联系。 二、UPP的作用机制 UPP 可通过识别、 标记、 进而降解那些被泛素化的蛋白质发挥作用。整个过程分三个步骤: ( 1) 单泛素化 ( 2) 多聚泛素化 ( 3) 降解靶蛋白 单泛素化 单泛素化是一个由多种酶（E1、E2、 E3 ）和ATP 参与的级联反应。与磷酸化相似，泛素化是一个可逆的过程，通过泛素化酶和去泛素化酶维持平衡。单泛素化不能降解靶基因，只是起到调节作用。泛素化过程如下图所示。 图1 泛素化的过程 多聚泛素化 多聚泛素化，即由数个泛素分子形成的泛素链C端的甘氨酸与单泛素化底物特异性结合。Ub 与靶蛋白的共价连接，至少需要4 － 5 个Ub 连接到靶蛋白上，形成多聚泛素链。 降解靶蛋白 靶蛋白多聚泛素链形成后必将运送到26S 蛋白酶体，进而降解，释放游离泛素。 （1）19S 亚基的唇部识别泛素化了的靶蛋白，基座中的有6 个ATP 酶解开蛋白的二级结构，并使其进入20S 催化亚基的催化中心。 （2）靶蛋白被水解成含3 － 22 个氨基酸残基的多肽，而多级泛素链在泛素再循环酶的作用下分解成单个泛素分子，释放出来被重新利用。如此形成一个完整的泛素－ 蛋白酶体途径的循环。 泛素-蛋白酶体途径 （Ubiquitin-Proteasome Pathway，UPP） 蛋白质降解 去泛素化 泛素活化 泛素结合 26S 蛋白酶体 小肽 泛素 目标蛋白 DUBs 三、UPP与疾病 UPP与许多人类疾病有关。与泛素相关的疾病可分为2种: 一种是泛素体系酶的突变导致的功能丧失或者是目标底物蛋白识别基序的改变,而导致某种蛋白的稳定。 另一种是目标蛋白功能不正常或加速降解的结果。 泛素蛋白酶体途径是细胞内环境稳定的关键调节