化妆品微生物_方案.pptVIP

化妆品微生物检验 目前化妆品检验依据的《化妆品卫生规范》中微生物检验规定的五项指标:菌落总数、粪大肠菌群、绿脓杆菌、霉菌与酵母菌、金黄色葡萄球菌 化妆品微生物标准检验方法总则 ?1 样品的采集及注意事项 1.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。包装量小的样品，取样量可酌减。 1.2 供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。 1.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。  化妆品微生物标准检验方法总则 ?1 样品的采集及注意事项 1.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其他分析。 1.5 在检验过程中，从开封到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行。或在相应条件下，按无菌操作规定进行。 ?1.6 如检出粪大肠菌群或其他致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。  化妆品微生物标准检验方法总则 2 不同类型样品的检样制备。 2.1 液体样品 2.1.1 水溶性的液体样品，可量取10ml加到90ml灭菌生理盐水中，如样品不少于10ml。仍按10倍稀释法进行。如为5ml则加45ml灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10稀释液。 2.1.1 油性液体。取样品10ml，先加5ml来菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在40~44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75ml（在44~44℃水浴中预温），在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。  化妆品微生物标准检验方法总则 2 不同类型样品的检样制备。 2.2膏、霜、乳剂半固体状样品 2.2.1亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混匀，放32℃水浴静置15min。用其上青液作为1：10的稀释液。 2.2.2疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在40~44℃水浴充分混合，制成1：10稀释液。  化妆品微生物标准检验方法总则 2 不同类型样品的检样制备。 2.2膏、霜、乳剂半固体状样品 2.2.3固体样品，称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，放30~32℃水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到30~32℃水浴中静置15min，取上清液作为1：10的稀释液。 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加到90ml灭菌生理盐水，均质1~2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品加到90ML SCDLP液体培养基，或1g样品加1ml灭菌液体石蜡、1ml灭菌吐温80、7ml灭菌生理盐水，均质3~5min。 检测的内容： 菌落总数 霉菌和酵母菌总数 特定菌 菌落总数的测定 化妆品菌落总数是指1g或1ml检样经过处理，在卵磷脂吐温80营养琼脂培养基上，于37℃培养48h后所生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的菌落总数。 判明样品被细菌污染的程度。菌落总数的测定是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 标准平板计数法 菌落总数的测定 操作注意事项1）尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。2）制成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在1小时内操作完毕。3）注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少。而高释释度时菌落数反而增大。4)?对照试验。化妆品的稀释液（特别是1:1O的稀释液）常带有化妆品颗粒，有时与菌落很难区分，为了避免与细菌菌落发生混淆，可作一个检样稀释液与琼脂混合的平板，不经培养放到4℃环境中，以便计数检样菌落时用作对照。 测定时，首先将待测样品制成均匀的、一系列不同稀释度的稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散，使之成为单个细胞状态存在（否则1个菌落就不能代表1个菌）；再取一定稀释倍数的一定量稀释液接种到培养基上，使其均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的数目，可计算样品中的含菌数。 由于所计算出的菌数是培养基上长出来的菌落数，故不包括死菌，因此菌落总数的测定又称为活菌计数。 试验步骤 1.菌落总数的检验程序（图1） 检样 ↓