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Diagnostic Microbiology:微生物学的一个分支,主要研究各种微生物的实验室方法,即如何快速、正确地检出微生物，以帮助诊断或判断。 *微生物分类的基础:（三种基本类型） 1、非细胞型微生物：这类微生物体积小，能通过细菌滤器、无细胞结构、无产生能源的酶系统，由单一核酸（DNA或RNA)核蛋白衣壳组成。必须在活的易感细胞内生长繁殖。属于这类的微生物是病毒。 2、原核细胞型微生物:他们由单细胞组成，细胞核的分化程度较低，仅有原始核，染色体仅有单个裸露的DNA分子，无核膜和核仁。细胞壁由肽聚糖构成，缺乏完整的细胞器。属于这类的微生物有细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次体。 3、真核细胞型微生物：他们大多由多细胞组成，细胞核分化程度高，有典型的核结构（核膜、核仁核染色体）细胞壁由纤维素、几丁质构成，属于这类型的微生物有真菌、藻类。 *微生物检验与鉴定异同 相似之处：菌株的分离、纯化 、性状测定等 区别 1. 工作目的 鉴定（分类）：对分离物进行识别，并按相似性或同源性界定该分离物在分类系统中的地位。 鉴定（检验）：分离物在检验对象中是否存在是问题的关键，而该菌的分类地位并不重要。 2. 诊断(鉴定)方案是在分类研究的基础上制定出来的。 3. 检验过程中,多采用特有的鉴别特征或试验,而无须象分类鉴定工作那样,需对分离物进行全面的分析。 检验中，多选用形态和生理生化等表型特征。必要时才借助一些较复杂的方法：DNA碱基组成、核酸同源性等。 *快速鉴定：在对样品进行检测的过程中，无须进行微生物的分离纯化或常规试验，而利用有关技术，在几小时乃至几十分钟内从混杂样品中直接确定是否存在某种活菌、微生物产物或抗原成分的鉴定方法。 革兰氏染色 染色原理 化学学说：G+ 菌与核蛋白镁盐、多糖形成复合物（G+—核蛋 白镁盐—多糖），可与结晶紫—I2 牢固结合。 等电点学说： G+（pI = 2 ~ 3）＜ G- （pI = 4 ~ 5） 中性溶液中，电荷数 G+ ＞ G- 菌，易与碱性染料结合，不易脱色。 渗透性学说：与菌体细胞壁结构有关。G+的细胞壁是肽聚糖形成的网状结构；G－细胞壁成分是肽聚糖含量的，主要是脂壁酸，结构松散。 分离 1） 稀释分离 （经典、标准分离法） —— 适用于饮水、牛乳、植物病原菌、尿液等样本 稀释度 10-1 ~ 10-5 2） 划线分离（曲线划线法）（常用技术） 分区划线法：多用于含菌量较多的样品。 连续划线法：含菌量不多的样本或培养物 一般接种方法(5种） 1）斜面接种法(沾菌和挑菌) —— 用于移植纯种，鉴定或保存菌种之用 2）穿刺接种 —— 多用于双糖、半固体、明胶等培养基的接种 双糖铁：直刺至管底； 细菌动力观察： 不穿至管底 3） 液体接种:挑菌或稀释接种 —— 单糖发酵试验 4）倾注平板接种法:融化45-50℃时混菌接种 ——抑制真菌试验 5）涂布接种法:加一定量的菌液用涂棒涂均匀 ——抑制细菌和酵母菌试验 固体培养基 菌落描述方法： 光滑型（S型）：边缘整齐，表面光滑 粗糙型（R型）：表面粗糙，边缘不整齐，有些是S型的失去菌体表面多糖或蛋白质形成的。 黏液型（M型）： 表面光滑，湿润有粘液，多见于有厚莢膜或丰富的黏液层的细菌。 细菌的生化试验：由于不同的细菌产生的酶系不同，因而对底物的分解能力也不同，用生物化学的方法测定这些代谢产物，可用来区分和鉴定细菌，这种生化反应的测试方法即称为生化试验 葡萄糖的氧化/发酵试验，又称O/F试验或Hugh leifson(HL)试验： 原理：细菌分解葡萄糖可分为氧化型、发酵型和产碱型三种类型。 氧化型：仅在有氧的环境中分解葡萄糖 发酵型:无论在有氧或无氧的环境种都能分解葡萄糖 产碱型：无论在有氧或无氧的环境中都不能分解葡萄糖 －－适合与G－肠道杆菌的鉴别：G－肠道杆菌为发酵型；其它为非发酵型；微球菌均为氧化型；葡萄球菌为微产碱型。 其它生化试验 溶血试验 原理： 细菌代谢过程中产生溶血素，使红细胞溶解 方法： ※ 平板法 ： 接种菌到血液琼脂平板， 35℃ 24 h α溶血：又叫草