肌肌酸激酶MB同功酶克隆及原核表达.docVIP

人心肌肌酸激酶MB同功酶的克隆及原核表达 李子颖，贾娟娟，刘一兵，韩世泉【摘要】 目的 构建人肌酸激酶MB同工酶的原核表达系统，纯化重组酶蛋白并检测其活性。方法 从购买的含CKM、CKB基因片段的质粒中扩增人肌酸激酶M、B亚基基因，构建pGEX-4T-1-CKMB E．coli BL21 (DE3)GST原核表达系统。以异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。利用重组蛋白的GST标签亲和层析纯化。结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期相符，诱导表达后细菌裂解液纯化后SDS—PAGE在分子量110,000（CKMB）处显示单一蛋白条带，采用酶联免疫分析的方法进行免疫活性实验，所得的蛋白和CKB、CKM抗体都有免疫结合。结论 成功表达并纯化了人肌酸激酶MB同工酶。 【关键词】：人肌酸激酶MB同工酶；原核细胞；基因表达 Cloning and expression of humn creatine kinase-MB isoenzyme(CK-MB) Li Zi-ying*, Jia Juan-juan, Liu Yi-bing, Han Shi-quan（*Atom HighTech Co., Ltd.， Beijing，102413 ，China） 【Abstract】 Objective To clone the whole gene of human