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第八章 分子发光分析 8.1.7 荧光分析法及其应用 8.1.7.2 应用 电子由第一激发单重态的最低振动能级，以系间窜跃方式转至第一激发三重态，经振动驰豫，转至其最低振动能级，由此激发态回到基态时，发射磷光。 荧光由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的； 使用含有重原子的溶剂或在磷光物质中引入重原子取代基，可以增加磷光效应，分别称外部重原子效应和内部重原子效应。 8.3 化学发光分析法 8.3.1 概述 化学发光分析的特点 1. 灵敏度高； 8.3.2 化学发光分析的基本原理 化学发光效率 化学发光强度 当CBCA时， CB 为常数，发光反应可视为一级反应 8.3.3 化学发光反应的类型 1. 液相化学发光 2. 气相化学发光 广泛应用于大气污染监测、可监测空气中的O3；NO、 NO2；SO2；H2S；CO；乙烯等。 2. 线性范围：一般有5-6个数量级； 3. 仪器设备简单，成本低廉； 4. 分析速度快，易实现自动化； 5. 局限性：可供发光用的试剂有限，发光机理有待进 一步研究 1. 化学发光反应的基本条件 (1) 化学反应必须产生足够的化学能 A + B C* +D 产物接受反应能被激发 C* C + h ? 化学反应多是在有O3、H2O2等参加的高能反应中。 (2) 处于激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态 取决于发光所依据的化学反应本身 与荧光效率的影响因素相同，既取决于发光体本身的结构和性质，也受环境的影响 激发态分子的化学效率 激发态分子的发光效率 C + h? ICL随时间和反应物消耗的变化逐渐减小 化学发光强度ICL(t)与反应速度、化学发光效率的关系： 对下列化学发光反应 A + B C* +D 非生物体的化学发光效率一般不超过1% A + B C* +D 发光物质 化学发光总强度与分析物浓度呈线性关系，可用于定量分析 待测物质 发光总强度 研究和应用的比较广泛的有鲁米诺、光泽精、没食子酸、洛粉碱、过氧草酸盐等。 鲁米诺是最常用的发光试剂，可以测定Cl2、HOCl、OCl-、H2O2、O2和NO2，化学发光反应的量子效率为0.01~0.05 鲁米诺在碱性溶液中和H2O2等氧化剂反应，生成最大波长为425 nm的光辐射 氧化剂 反应产生的化学能被产物氨基邻苯二甲酸根吸收，处于激状态，返回基态时发射荧光。可检测10-9 mol/LH2O2 425 nm 测定Co(Ⅱ),Cu(Ⅱ), Ni(Ⅱ), Cr(Ⅲ) 等过渡金属离子. 应用 1) 鲁米诺H2O2的化学反应，可以被一些痕量的过渡金属元素所催化，使发出的光大大增强； 检测限由0.01~40 ?g·mL-1不等 2) 利用鲁米诺发光体系可以测定50余种元素和大量有机 和无机化合物，灵敏度都比较高 3) 鲁米诺化学发光体系还可用于许多生化反应研究，常常 涉及到H2O2的产生或H2O2参加反应 例： NO + O3 NO2* + O2 NO2* NO2 + h? ?≥600nm 常温下产生化学发光，灵敏度可达1ng·mL-1；测定范围0.01~10000 ?g·mL-1 CO + O（原子氧） CO2* CO2* CO2 +h? ?=300-500nm 灵敏度为1ng·mL-1 例： * * M + 能量 M＊ M + 热量 M + 热量 + h? ′ 10-7-10-9s荧光F 10-3-10s 磷光P 分子发光：基态分子吸收能量被激发，然后从不稳定的 激发态返回基态并发射出光子的现象 发光分析的特点： 1) 灵敏度高。检测限比吸收光谱法低1-3个数量级。 2) 发光参数多，可进行动力学分析。 3) 线性范围宽。 4) 选择性比吸收光谱法好。 5) 应用范围不及吸收光谱法广。 单重态基态，S0 S=+1/2-1/2=0 M=2S+1=1 激发单重态，Si S=+1/2-1/2=0 M=2S+1=1 激发三重态，Ti S=+1/2+1/2=1 M=2S+1=3 允许跃迁 禁戒跃迁 1) 单、三重态电子自旋方向不同，且激发三重态能级较低； 2) 三重态的寿命更长。 1. 激发态 8.1 分子荧光法 8.1.1 荧光产生的机理 2. 去活化过程 失活过程 辐射失活 非辐射失活 分子间能量转移失活 荧光 磷光 振动驰豫 内转换 外转换 系间跨跃 处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射跃迁等去活化过程返回至基态。这些过程包括： 1) 振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 同一电子能级内，以热能量交换形式由高振动能级至相邻低振动能级间的跃迁。 振动驰豫时间：10-12s 2) 内转换（Internal Conversion，