第二节动物细胞工程技术精要.ppt

动物细胞工程 思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 一、动物细胞培养的概念和原理： 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 细胞： 分为细胞株和细胞系 植物组织培养和动物细胞培养的比较： 人—鼠细胞融合过程 动物细胞融合 2、诱导融合的方法 物理法：电激融合 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 生物法：灭活的病毒诱导融合.(动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的外壳——磷脂与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 3、动物细胞融合技术的应用 意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 主要用途：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 二）：动物细胞融合的成功应用 ——单克隆抗体的制备 人们获得抗体的传统方法是什么? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ - B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 ? 动物特异性免疫 ? 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） ? 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） ? 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） ? 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 ? 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 ? 提取单克隆抗体。 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向—准确找到癌细胞位置；药物—原位杀死癌细胞。） 二、动物细胞工程的应用 快速繁殖优良品种 克隆转基因动物 拯救濒危灭绝的动物 培育人造器官 思考 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 问题： 1）、本过程利用了哪些原理？ ①免疫原理； ②细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 同种生物的细胞没有免疫排斥反应； 融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质。（不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体） 3）、为何要进行两次筛选？ 4）、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 问题： 1、单抗的制备过程要点： 2、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 3、单克隆抗体的应用 三）、动物体细胞核移植技