第三蛋白激酶与信号传导精要.ppt

第三章 蛋白激酶与信号传导 细胞信号传导的主要方式：－－蛋白质磷酸化 蛋白质磷酸化位点：－－ Ser/Thr、Tyr、His 磷酸化催化作用机理：蛋白激酶的作用 蛋白激酶类型： 蛋白质激酶：Ser-OH 、Thr-OH 酪氨酸蛋白激酶：Tyr-OH 第一节：蛋白激酶A (PKA) 一、蛋白激酶A的特征： PKA: cAMP依赖性蛋白激酶 作用： 代谢的调控、细胞信号传导 组成： 两个催化亚基(C) 、两个调节亚基(R) C2R2四聚体 二、PKA的分类 R亚基： I 类(RI)： RI 49 kD ， RI? 、 RI? II 类(RII)： RII 55 kD ， RII? 、 RII? C亚基：C?、C?、C? ，40 kD PKA全酶：R2C2 180 kD 三、PKA的结构： 1. C亚基的结构特点： N-端有一个ATP结合区，富含甘氨酸序列: GXGXXGX16K 在Lys72和Glu91形成离子对 Ala 70 与腺苷酸的识别有关 催化中心位于分子中部，具有结合多肽底物和催化磷酸基团转移的作用 R165DLK168PEN171氨基酸残基构成一个环，其中D166(Asp)是磷酸基团转移的基础。 K168(Lys)具有稳定中间态和降低活化能的作用 Asp184是金属离子结合位点 2. R亚基的结构特点： R亚基分为3个结构域 N端是二聚化结构域，负责和另一个R亚基的聚合 C端有两个cAMP结构域，分为A、B结构域。A结构域结合cAMP较慢、B结构域是优先结合cAMP的位点 在二聚化结构域和cAMP结构域之间为：假底物模体(在RI) 或真底物模体(在RII)，其氨基酸组成：RRNAIS (RI) / RRVSVC (RII) 四、PKA功能： C亚基具有催化活性，它识别底物为RRXS/T 和RXS/T，在接受磷酸基团S/T的羧基端的氨基酸为蔬水氨基酸。在测定PKA活性时，肝丙酮酸激酶的底物：肯普肽(kemptide) , LRRASLG是很好的底物，若七肽的S改为A，则转变为抑制剂。 R亚基是cAMP结合的靶蛋白，在PKA的四聚体中，它作为“假底物”而抑制C亚基发挥催化作用,只有当cAMP结合R亚基后，解离状态的C亚基才有催化作用 五、PKA的分布 I 类主要存在于非神经细胞，尤其在骨骼肌和心肌最为丰富。 II 类主要存在于神经细胞中。 靶向假说：targeting hypothesis 磷酸化事件至少部分地接受了蛋白激酶在细胞中定位的调控。 蛋白激酶的定位对其功能的发挥有重要的作用. PKA的定位有关的“锚蛋白” (AKAP) 能跟RII亚基结合，使得PKA定位于不同的部位。 第二节、蛋白激酶 C (PKC) 是一种Ser/Thr 蛋白激酶， 日本学者Nishizuka 1977年，首先发现存在于鼠脑细胞中。受甘油二酯（DG）和Ca2+的激活，因为其受到Ca2+的激活而被命名为蛋白激酶C DG是细胞对多种胞外刺激作用的第二信使，是肌醇磷酸脂或胆碱磷酸脂在磷酸脂酶水解而产生的 到目前，已发现PKC有12种亚型，根据结构特点和激活剂的不同可以分为3类： PKC的分类： 常规型PKC （Conventional PKC, cPKC）: 包括?、?I、?II、? 四种亚型。需要：Ca2+、DG(甘油二酯)、PS(磷脂酰丝氨酸) 新型PKC （novel PKC, nPKC） ?、?、?、?、?五种亚型。需要：DG、PS 非典型PKC （atypical PKC, aPKC） ?、?、? 三种亚型。只需要 PS激活。 第三节、蛋白激酶B (PKB) 一、概况： (PKB) 属于Ser/Thr 蛋白激酶 PKB的催化域与PKC?和PKA分别有73%和68%的相同。（related to the A and C kinases) T细胞性淋巴瘤逆转录病毒癌基因 (v-akt) 的产物: Akt PKB种类： PKB? (Akt1, PAC-PK?) PKB? (Akt2) PKB? (PAC-PK?) 二、PKB的结构 三、 PKB的激活 机理: 四、PKB的功能： 在体外，PKB可以磷酸化合成肽: RXRYZ(S/T)(Hy) 在体内: 磷酸化糖原合成酶激酶3－糖原合成增加 葡萄糖的吸收 核糖体蛋白S6激酶(p70S6k)－有关蛋白质生物合成 细胞的存活、增殖 细胞分化 细胞周期的调节 第四节、蛋白激酶G PKG : cGMP依赖性蛋白激酶 PKG-I (76 kD): ?、?两种，胞质中 PKG-II (86 kD): 膜蛋白 一、PKG的结构： 二聚化结构