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真菌 第二十二章白假丝酵母菌 重点 1.白色假丝酵母菌的生物学特性 2.白色假丝酵母菌的微生物学检查 真菌学概述 概念: 是一类有典型的细胞核和完善的细胞器,不含叶绿素,无根、茎、叶分化的真核细胞型微生物。 真菌的形态特性 (一)单细胞真菌呈圆形,如酵母菌。 (二)多细胞真菌由菌丝和孢子组成, 称丝状菌或霉菌。 菌丝和孢子的形态因菌而异,是鉴定真 菌的重要依据。孢子又分为多种,如叶 状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。 真菌的形态特性 单细胞真菌 酵母菌:孢子,无菌丝 类酵母菌:芽生孢子,假菌丝 多细胞真菌 丝状菌(霉菌):孢子和菌丝 菌丝和孢子的形态因菌而异,是鉴定真菌的重要依 据。孢子又分为多种,如叶状孢子、分生孢子和孢 子囊孢子等。 真菌菌落特性 1.酵母型菌落: 是单细胞真菌的菌落,形态与细菌 菌落相似,较大,表面光滑湿润柔软、边缘整齐,如 新生隐球菌。 2. 类酵母型菌落:如白假丝酵母菌,形成假菌丝, 伸入培养基中。 3.霉菌型菌落: 是多细胞真菌的菌落。菌落呈棉絮 状、绒毛状,并产生不同的色素,如皮肤癣菌。 培养特性 真菌培养要求不高,常用沙氏(Sabouraud)培养基 (含1%蛋白胨、4%葡萄糖或麦芽糖、2%琼脂)培 养,适宜温度22℃—28℃,但深部真菌为37℃。适宜 PH值为4.0-6.0。 菌落是鉴别真菌的方法。注意以下几点: ①菌落性质:酵母菌还是霉菌; ②菌落大小,病原性真菌菌落小,而条件致病性真菌菌落大; ③菌落颜色 病原性真菌颜色淡,污染真菌颜色深; ④致病性真菌菌落下沉,有时使培养基开裂;污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。 真菌依靠孢子及菌丝进行无性或有性繁殖 变异性抵抗力 易发生变异 形态、培养性状和毒力等 抵抗力较强 对干燥、紫外线及一般消毒剂抵抗力强对热敏感, 60℃1小时菌丝、孢子均被杀死对2%石炭酸、 0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感对作用于 细菌抗生素不敏感,对二性霉素B制霉菌素、咪康 唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感。 致病性与免疫性 致病性 1.致病性真菌感染: 浅部真菌:角蛋白酶、机械刺激、代谢产物 深部真菌:慢性肉芽肿、组织溃疡 2.条件致病性真菌:假丝酵母菌 3.真菌超敏反应性疾病 4.真菌性中毒症 5.真菌毒素与肿瘤 免疫性 天然免疫 获得性免疫: 体液免疫、 细胞免疫 真菌感染的病原学诊断 标本的采集 临床标本类别: 1.皮肤的角质性物质:毛发、指(趾)甲、皮屑等。 2.各种分泌物和排泄物:生殖道、分泌物、耳垢、痰、 粪便、尿 液等。 3.血液和体液:体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿 刺液等。 4.脓汁及渗出物。 采集标本注意事项: 1.采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同的临床标本。 怀疑为浅部真菌感染如体癣,应刮取病变边缘的痂、皮屑,发 癣应取病发。深部真菌感染应取血液、脑脊液、脓汁等。 2.在用药前采集标本 一般真菌标本须在用药前采集,对已 用药者则需停药一段时间后再采集标本。 3.采集的标本量要足 血液和脑脊液5ml,胸腔液20ml,皮屑 标本两块,活体组织两份(一份病理检查,一份镜检和培养)。 4.严格无菌操作 并进行消毒处理,尤其是采集血液和脑脊 液标本,要避免污染杂菌。 5.采集标本立即送检 深部真菌标本最长不得超过2h。 检验程序P354 检验方法 直接检查 不染色和染色镜检 培养检查法 培养基的选择 培养方法:直接法、试管法、大培养、小培养 真菌的鉴定 生化反应用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。 1.糖(醇)类发酵试验 37℃孵育,观察糖发酵情况。 2.同化碳源试验 含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养 基(45℃)混合,然后在培养基上分别加糖,置25℃孵育观察 结果。若24h后无变化可重复加糖。如能同化周围有生长圈, 否则无生长。 3.同化氮源试验 同化碳源试验相同,但需用无氮源的培养基,不要加糖类,而加入硝酸钾。 4.明胶液化试验、尿素分解试验、测定淀粉样化合物 5.分解牛乳试验 抗原检测 常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法。均 应设对照,防止发生假阳性和假阴性。 动物实验 实验的目的是分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究 药物对真菌的作用等。如假丝酵母菌接种家兔或小白鼠,肾脏 明显肿胀,肾皮质部位有白色脓疡。 核酸检测 从核酸碱基G+C mol%分析、限制性片段长度多态性(RFLP)、 Southern印迹分析到脉冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR指纹、随机 扩增多态性DNA(RAPD)以及DNA特殊片段
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