白血病分子诊断技术(咸阳)要点.pptVIP

* * * * 淋巴细胞从原始的胚系构型到分化成熟, 其抗原受体IgH基因通过基因重排而形成有功能的基因. 一个B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记。一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性变化, 即可呈现特异的基因重排. 本检测通过检测特异的基因重排来反映B淋巴细胞的增殖情况，辅助疾病的鉴别诊断、预后判断（CLL）和疗效监测。 * T淋巴细胞从原始的胚系构型到分化成熟, 其表面受体TCR基因通过基因重排而形成有功能的基因。一个T细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记. 一旦某一克隆的T淋巴细胞发生恶性变化, 即可呈现特异的基因重排。本检测通过检测TCR基因（TCRβ，TCRγ和TCRδ）重排来反映T淋巴细胞的增殖情况，辅助疾病的鉴别诊断、预后判断和疗效监测 TCRB基因重排方式：A（Vβ-Jβ），B（Vβ-Jβ），C（Dβ-Jβ） TCRG基因重排方式：A（Vγ-Jγ），B（Vγ-Jγ） TCRD基因重排方式：Vδ-Jδ * * 荧光标记的DNA探针，利用探针与被检测样本中DNA互补，在探针与样本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出的结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。 * 若病人用药，则很难找到分裂相，则不能通过染色体核型分析。但用药间隔2周以后可以做FISH，即便是染色体正常的急性白血病，亦可能查出分子诊断的异常。 * * 多发性骨髓瘤（MM）是克隆性的浆细胞恶性肿瘤。 浆细胞恶性的病人会有特征性的浆细胞数目增多，浆细胞胞质表达单个的轻链。由于浆细胞表面很少或不表达免疫球蛋白，因此研究者将细胞经过透化处理，在胞质中检测κ和λ轻链的表达情况。如果临床需要，也可以检测重链的表达情况。 多发性骨髓瘤（MM）： CD38：在大多数恶性浆细胞上表达，但阴性细胞更具有增殖活性 CD56：水平降低预示病情恶化或向浆细胞白血病转化。随着病情进展，终末期患者以及髓外浸润灶的恶性浆细胞不再表达CD56 CD138：低水平的细胞表面CD138是MM不良预后因素 * * AML患者表达了交叉系列的抗原如：CD19、CD20；CD2、CD7 * * 康圣环球形成了覆盖北京，武汉，上海，香港的6家实验室综合服务网络，服务领域涵盖普检和高端专科特检项目 * 康圣环球形成了覆盖全国31个省，直辖市的服务网络，这是目前行业内的最大的服务网络。合作医院已经超过1800余家，其中合作的大型三甲医院500余家。 * BCL-2/JH t(14;18)易位是B细胞淋巴瘤的特有性变异，90%的滤泡性淋巴瘤和20-30%的弥漫性大B细胞淋巴瘤含有此易位。 BCL-2/JH检测 标本要求 骨髓2-3ml或外周血3-5mL （复发和 微小残留的检测：骨髓2-3ml） EDTA抗凝（紫头管）， 4℃，24h内送检。 细胞遗传学 ——染色体核型分析 FISH 染色体核型分析 适应症 1.造血系统疾病初诊 2.末次化疗结束两周以上 意义 对恶性血液病的诊断，分类分型，治疗方案选择，疗效评估和预后预测方面都有重要的价值。 46，XY t (9;22)(q34;q11), 约占95%CML Ph染色体 染色体核型分析 ——诊断 8三体 ——单独或附加异常，较多见于M1，M4， M5，预后差或中等 46,XY,+8 FISH检测 荧光标记的DNA探针 原位杂交 荧光显微镜检测 FISH相对于染色体检测，灵敏度高，特异性高。 可以弥补染色体不足，染色体检测为阴性，FISH可能为阳性。 患者用药后，染色体阳性率较低，FISH可提高检出率。 染色体核型与FISH 变异型Ｐh（复杂遮蔽型）易位 FISH探针：BCR/ABL 检测结果 nuc ish 9q34(ABL×2) ,22q34(BCR×2)(ABL con BCR ×1)[200/400] 正常FISH组合结果，中位生存期约为111个月。 FISH探针套系：CLL 各探针 中位生存期（月） p53基因缺失 32 ATM缺失 79 12号三体 114 13q14 133 RB1缺失 133 FISH探针套系：MM 各探针 中位生存期（月） P53缺失 24.7 RB1缺失 42.3 D13S319缺失 42.3 1q21位点扩增 提示预后差 IgH基因重排 辅助诊断 FISH探针套系：MDS 预后 各探针 中位生存期（月） 好 5q- 24 中 +8 18 差 -7/7q- 12 20q- 标本要求 骨髓3－5ml ，肝素钠抗凝