四君子护康颗粒剂的主要药效学的研究.docVIP

主要药效学研究 四君子汤可以促进MTL的分泌,改善和促进胃肠动力，治疗脾胃气虚证。对面色萎白，语声低微，气短乏力，食少便溏，舌淡苔白，脉虚弱等均有疗效。（常用于慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡等属脾气虚者。） 研究资料 中医认为脾的主要功能是“脾主运化”,脾失健运则机体的消化、吸收等功能减退,说明中医学“脾”的主要生理功能及病理表现与现代医学消化系统关系密切。观察消化道各部分消化功能及影响因素是研究中医“脾主运化”理论的重要组成部分。胃肠激素在调节胃肠道的消化吸收等活动中起着非常重要的作用,胆囊收缩素(cholecysto-kinin, CCK)、胃动素(motilin, MTL)与动物的胃肠运动功能密切相关。但目前的相关文献多局限于胃肠运动或胃肠激素的单方面研究,对胃肠道消化功能的多层面研究较少。因此,笔者等以利血平建立大鼠脾虚模型,检测胃肌电活动和胃肠运动的变化,以及胃和小肠内CCK和MTL蛋白含量的变化,探讨健脾补虚经典方剂四君子汤对脾虚大鼠消化运动功能的影响。 1　材料与方法 1.1　药品及主要试剂 仪器健康雄性SD大鼠36只(体重290±20 g),北京维通利华实验动物技术有限公司提供。利血平注射液(1 mg/mL,批号090409)购自广东邦民制药厂有限公司;四君子汤颗粒(批号080301)购自湖北武当生物制药有限公司;羧甲基纤维素钠购自sigma公司;速眠新Ⅱ购自军需大学兽医研究所(批;蛋白提取试剂盒、蛋白BCA法测定试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司; CCK、MTLELISA测定试剂盒购自RB公司;生物医学信号采集处理系统(Pclab-UE, China);超低温冰箱(SANYO, Japan); 680型酶标仪(BIO-RAD, USA)。 1.2　动物分组和模型处理 供试大鼠适应性饲养3 d(每天给予充足的饲料和饮水),随机分为3组:对照组、脾虚组和治疗组。脾虚组、治疗组腹腔注射利血平0. 5 mg/kg·d[1],对照组腹腔注射相应剂量的生理盐水;同时,四君子汤治疗组灌服四君子汤8 mL/kg·d(剂量根据人和大鼠体表面积换算,约合生药0. 233 g/mL),对照组和脾虚组灌服相应剂量的生理盐水,连续7 d。每天观测大鼠临床表现,于试验0、8、15 d测定各组大鼠体重变化。 1.3　胃排空率的测定 取羧甲基纤维素钠10 g,溶于250 mL蒸馏水中,加入奶粉16 g,糖8 g,淀粉8 g,活性炭3 g,搅拌均匀最后制成约300 mL营养性半固体糊,冰箱冷藏,用前2 h取出,恢复至室温。试验14 d,禁食24 h,每组随机取4只大鼠按10mL/kg营养性半固体糊灌胃,灌胃前称定营养性半固体糊重量。30 min后断颈法处死大鼠,剖腹取全部胃肠,自幽门切迹处取胃,拭干称重,沿胃大弯剪开胃体,洗去胃内容物后拭干,称净重。计算胃排空率(% ) =〔1-(胃全重-胃净重)÷营养性半固体糊重量〕×100。 1.4　肠推进功能测定 自盲肠处取上述大鼠的全肠,不加牵拉铺平于白纸上,分别量取自幽门括约肌至营养性半固体糊最前端(营养性半固体糊移动距离)及至盲肠(幽-盲全长)的距离。计算肠推进比(% ) = (营养性半固体糊移动距离÷幽-盲全长)×100。 1.5　胃窦肌电测定 试验15 d,从每组剩余大鼠中随机取4只,速眠新Ⅱ按1 mL/kg肌肉注射麻醉后,仰卧保定,打开腹腔,将一对正负电极(间距1. 5 mm)置于胃窦浆膜下,接地电极置于左下肢骨骼肌内。在麻醉状态下记录胃肌电变化,每次记录30 min,计算机采集胃肌电波形及频率的变化。 1.6　胃肠道组织中CCK和MTL蛋白含量 变化试验15 d,将每组剩余4只大鼠断颈处死,浸入75%酒精3-5次,取出置于无菌容器中。在无菌条件下取出胃和小肠,立即用生理盐水冲洗干净,分别取胃窦(从胃幽门至胃小旁角切迹处取胃窦腹侧壁全层组织)、十二指肠(距离幽门口5 cm处)、空肠(距离幽门口20 cm)、回肠(接近盲肠15 cm处),迅速置于液氮中, -80℃保存。提取试验各组大鼠胃窦、十二指肠、空肠和回肠中总蛋白,用BCA法测定总蛋白含量, ELISA检测CCK和MTL含量,严格按试剂盒说明书操作。 1.7　统计处理 用DPS7. 05统计软件,显著性分析采用方差分析,结果以平均值±标准差表示。 2　结果 2.1　临床症状 脾虚组在注射利血平后第3天开始出现明显腹泻症状,第5天开始出现肛周污秽,消瘦,被毛枯槁无光泽,精神萎靡、扎堆、拱背等症状。治疗组粪便基本成形,体重上升,无明显萎靡、扎堆、拱背症状,与脾虚组比较,症状明显好转。 2.2　四君子汤对胃排空和肠推进影响 与对照组比较,脾虚组胃排空率下降,肠推进率升高,差异极显著(P0.