β半乳糖苷酶合成的诱导与阻遏-讲义2.docVIP

选做实验 E·coli乳糖操纵子—酶的诱导与阻遏一、实验目的通过测定野生型E·coli生长在各种不同碳源上β半乳糖苷酶的活性，掌握E·coli乳糖操纵子合成β—半乳糖苷酶的调节类型和机制。 二、实验原理当E.coli生长在缺乏β-半乳糖苷的条件下是不需要β-半乳糖苷酶的，因此细胞中含量很低，大约每个细胞不高于5个分子，当加入乳糖等底物后细菌中十分迅速地合成了这种酶。如在培养基中除去底物，那么酶的合成也就迅速停止，并逐渐恢复到原来的状态。 研究还发现，当培养基中同时存在乳糖和葡萄糖时，大肠杆菌会优先利用葡萄糖，只有当葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，也就是葡萄糖效应。葡萄糖效应并不是由葡萄糖直接造成，而是葡萄糖某种分解代谢物引起的。 三、实验材料1、2、试剂： TTLM 溶液[%]：硫胺素 0.3g，苏氨酸0.2g，亮氨酸0.2g，蛋氨酸0.2g 2）MM溶液[%]：K2HPO4 1.05g，KH2PO4 0.45g，[NH4]2SO4 0.1g，MgSO4·7H2O 0.1g1ml TTLM溶液MMG培养基MM溶液100ml+50%甘油1mlMMLac培养基MM溶液100ml +乳糖MMGlu培养基MM溶液100ml +葡萄糖MMLacGlu培养基MM溶液100ml +乳糖 +葡萄糖[高压灭菌115度] 4）0.1 M磷酸缓冲液H7.2）：41ml 0.2M Na2HPO4 + 9m