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基因工程 治疗糖尿病特效药—— 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ 思考： ⒈自然界是否存在一种生物的DNA进入另一生物的情况？ 2.单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是并没有在进化中灭绝，有何保护机制？ 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ⒈主要来源： ⒉种类与命名： ⒊作用特点（特异性） 4.限制酶识别序列 5.作用结果： ⒉种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。 　 　 二、“分子缝合针” —— DNA连接酶 　 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 3、载体需要的条件： 　⑴有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 　⑵对受体细胞无害 　⑶能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存 　⑷有某些标记基因，便于筛选 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 Go back 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 ①作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶的异同 不同点： 1.都形成磷酸二酯键 1)DNA聚合酶：需要模板，连接单个核苷酸形成互补单链 2)DNA连接酶：不需要模板，连接DNA片段形成双链DNA 2.化学本质都是蛋白质（但组成和性质各不相同） 相同点： 1、载体的作用 将 转移到受体细胞中去。 目的基因 2、种类 质粒（常用），最常用的质粒是大肠杆菌的） λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 1）质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 4、质粒是基因工程最常用的载体。 2）质粒DNA上有一个或多个限制酶的切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中。 3）携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，在细胞中进行自我复制，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA进行同步复制。 4）质粒DNA上有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 * 专题1 每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。 　　1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。 据WTO调查： 2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。 胰岛素 思考：转基因技术实现了一种生物的某些性状 在另一种生物中表达。这些性状的表达与我们学过的基因的什么过程有关？ 密码子在生物界是　　　的！ DNA(基因)　　　mRNA 蛋白质(性状) 转录 翻译 通用 基因工程的产物 什么叫基因工程？ 基因工程，又叫DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传特性。 基因工程的概念 基因工程的概念 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 → 拼接 → 导