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实验二  蛋白酶抑制剂的明胶-聚丙烯酰胺凝胶电泳 一. 目的： 1.学习和掌握蛋白酶抑制剂电泳基本原理及电泳技术。 2.熟练掌握蛋白酶抑制剂电泳有关试剂配制的技术和制胶技术。 二、原理： (一).聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis）: 是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。 单体的丙烯酰胺（CH2=CHCONH2 Acrylamide，简称Acr） 甲叉双丙烯酰胺（CH2(NHCOHC=CH2) 2 N,N’-methylenebisacrylamide,简称Bis） 聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。 常用的催化聚合方法有两种： 化学聚合和光聚合。 化学聚合:加入催化剂过硫酸铵［（NH4 ）2S2O3]（即AP）以及加速剂四甲基乙二胺（TEMED），四甲基乙二胺催化过硫酸铵产生自由基，这样由于乙烯基“CH2=CH－”一个接一个的聚合作用就形成丙烯酰胺长链，同时甲叉双丙烯酰胺在不断延长的丙烯酰胺链间形成甲叉键交联，从而形成交联的三维网状结构。 氧气对自由基有清除作用，所以通常凝胶溶液聚合前要进行抽气。 光聚合:催化剂是核黄素，核黄素在光照下能够产生自由基，催化聚合反应。一般光照2－3小时即可完成聚合反应。 聚丙烯酰胺的基本结构为丙烯酰胺单位构成的长链，链与链之间通过