蛋白质化学分析.ppt

蛋白质 ( protein ) 是由许多不同的α-氨基酸按一定的序列通过酰胺键（蛋白质化学中专称为肽键）缩合而成的，具有较稳定的构象并具有一定生物功能的生物大分子 测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40g,此样品约含蛋白质多少 ( ) A.2.00g B.2.50g C.6.40g D.3.00g E.6.25g 第二节 蛋白质的氨基酸组成 一、蛋白质的水解 完全水解得到各种氨基酸的混合物，部分水解通常得到多肽片段。 1. 酸水解 方法：常用6 mol/L HCl或4 mol/L H2SO4，回流 煮沸约 20 h。 优点：不引起消旋作用，得到的是L-氨基酸。 缺点：色氨酸被沸酸完全破坏；含有羟基的氨 基酸（丝氨酸、苏氨酸）有一小部分 被分解；天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基 被水解成羧基。 2. 碱水解 方法：一般用5 mol/L NaOH 煮沸10 ～ 20 h。 优点：色氨酸在水解中不受破坏。 缺点：多数氨基酸受到不同程度的破坏，产生 消旋现象，得到的是D-和L-氨基酸的混 合物。此外，引起精氨酸脱氨（生成鸟 氨酸和尿素）。 3. 酶水解 方法：用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（或称 蛋白酶, proteinase）已有十多种，常用 的有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶（或称糜 蛋白酶）及胃蛋白酶等。 优点：不产生消旋作用，也不破坏氨基酸。 缺点：使用一种酶往往水解不彻底，需几种酶协 同作用才能使蛋白质完全水解。该法主要 用于部分水解。 二、氨基酸 (amino acid) 的结构通式 除脯氨酸外，均为α-氨基酸 除甘氨酸外，均为手性氨基酸 除胱氨酸和酪氨酸外，其余AA都能溶于水。 ----C-C-C-C-COOH γ β α ----C-C-C-C(NH2)-COOH α-氨基酸 ----C-C-C(NH2)-C-COOH β-氨基酸 ----C-C(NH2)-C-C-COOH γ-氨基酸 ● ● ● ● 碱性氨基酸(二氨基一羧基)（2种） 2、芳香族氨基酸（3种） 3、杂环氨基酸（2种） 3、极性带正电荷的R基氨基酸（3种） 3种碱性氨基酸：Lys、Arg、His 在 pH7 时带正电荷 ?在 pH6.0 时，His 的 R 基 50% 以上质子 化，但 pH7.0 时，质子化的分子不到10%。 His 是唯一的R 基的pKa值在7附近的氨基酸 3个有个性的氨基酸 1）脯氨酸（Pro） 因为是一个环状的亚氨基酸, 它的氨基和其它氨基酸的羧基形成的肽键有明显的特点, 较易变成顺式肽键. 第四节 氨基酸的重要理化性质和功能 一、氨基酸的性质 （一）一般物理性质 α-氨基酸为无色晶体，熔点极高(一般在200℃以上)。有的无味、有的味甜、有的味苦、谷氨酸的单钠盐有鲜味(味精的主要成分)。 (氨基酸的味感与其立体构型有关。D-氨基酸多带有甜味，甜味最强的是D-色氨酸，可达蔗糖的40倍；L-氨基酸有甜、苦、鲜、酸四种不同味感。) 1、两性解离和等电点 两性离子是指在同一个氨基酸分子上带有能 放出质子的 -NH3+正离子和能接受质子的 -COO- 负离子。 氨基酸是两性电解质。 Handerson-hasselbalch pH=pKa +lg[质子受体]/[质子供体] （2）氨基酸等电点的计算 氨基酸的pI可由其分子上解离基团的解离常数来确定。 A. 等电点时，氨基酸的溶解度最小，易沉淀。 利用该性质可分离制备某些氨基酸。例如谷氨酸的生产，即将微生物发酵液的pH值调至3.22（谷氨酸的等电点）而使谷氨酸沉淀析出。 B. 利用各种氨基酸的等电点不同，可通过电泳法、离子交换法等在实验室或工业生产上进行混合氨基酸的分离或制备。 离子交换层析 以人工合成的高分子化合物(如苯乙烯－苯二乙烯树脂)做支持物，其上交联着可