第5章核酸分析.ppt

活化搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。 ?三级结构: —— 倒L形 ? rRNA的结构 3. rRNA的结构与功能 ? rRNA的功能： 参与组成核糖体，作为蛋白质生物合成的场所 原核生物 真核生物 5s rRNA 28s rRNA 5.8s rRNA 18s rRNA 5s rRNA 23s rRNA 16s rRNA 4 .其他小分子RNA 举例： 小核RNA、 小核仁RNA、 小胞质RNA 功能： 参与hnRNA和rRNA的转运和加工 MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成 Andrew Z. Fire Craig C. Mello “for their discovery of RNA interference - gene silencing by double-stranded RNA“ （1993） The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2006 MicroRNA 具有调节基因表达的作用 5 .核酶（ribozyme） 某些RNA分子本身具有自我催化能力,可以完成RNA的剪接。这种具有催化作用的RNA称为核酶。 五、DNA重组技术的基础（p143） DNA与限制性内切酶 双链DNA分子可以被上千种从微生物中分离得到的限制性内切酶（restriction enzyme）切断, 又可以再连接起来。切断的过程不需要能量，而连接的起来的过程却需要2个分子的ATP。这就是分子克隆和DNA重组技术的基础。 核酸酶 核酸酶指水解核酸的酶，实质上就是磷酸二酯酶，作用于3’，5’-磷酸二酯键。 核糖核酸酶 （RNA酶） 脱氧核糖核酸酶 （DNA酶） 内切酶：从核酸内部切割 外切酶：从核酸末端逐个切断磷酸二酯键 Cohesive/stick粘性 ends(5’- or 3’-); blunt ends平末端) 核酸的理化性质 The physical chemical characters of nucleic acid 第四节 Section 4 DNA的酸碱及溶解度性质 DNA有磷酸基及碱基，为两性大分子，但偏于酸性。 可与金属离子成盐，不溶于乙醇或异丙醇。 DNA的高分子性质 粘度： DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行为 DNA的紫外吸收 OD260 单核苷酸 ssDNA dsDNA 一、一般理化性质 二、DNA的变性（denaturation） 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 1 OD260 = DS DNA 50 ?g SS DNA 37 ?g RNA 40 ?g OD260 / OD280 ： 1.9~2.0 RNA 1.7 DNA 1.7 DNA with protein DNA的变性在紫外吸收上的变化 Hyperchromic effect 增色效应、减色效应 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 热变性 解链曲线：连续加热以温 度对OD260关系作图所得 的曲线。 增色效应：DNA变性时其 溶液OD260增高的现象。 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围 内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 Tm：熔解温度（melting temperature） Poly d(A-T) DNA Poly d(G-C) DNA的变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程中A260达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度，用Tm表示。 Tm的大小与DNA分子中（G+C）的百分含量成正相关，测定Tm值可推算核酸碱基组成及判断DNA纯度。 某些DNA的Tm值 60 80 100 1 .0 1 .4 1 .2 100% A26