第二章基因工程在食品工业中的应用分析.ppt

第二章 基因工程在食品工业中的应用 第一节 基因工程概述 一、基因工程的定义 二、基因工程的发展简史 一、基因工程的定义 二、基因工程的发展简史 （一）遗传物质的研究 （二）基因工程的诞生和发展 （一）遗传物质的研究 （二）基因工程的诞生和发展 第二节 基因工程工具酶 一、限制性内切核酸酶 二、DNA甲基化酶 三、连接酶 四、DNA聚合酶 五、碱性磷酸酯酶 六、T4 多聚核苷酸激酶 七、S1核酸酶 八、反向转录酶 一、限制性内切核酸酶 （一）限制性内切酶的命名 （二）限制性内切酶种类 （三）限制性内切酶的基本特性 （一）限制性内切酶的命名 （二）限制性内切酶种类 1. Ⅰ类限制性内切酶 2. Ⅱ类限制性内切酶 3. Ⅲ类限制性内切酶 1. Ⅰ类限制性内切酶 2. Ⅱ类限制性内切酶 3. Ⅲ类限制性内切酶 （三）限制性内切酶的基本特性 1. 识别特定序列 2. 切割方式 1. 识别特定序列 2. 切割方式 二、DNA甲基化酶 三、连接酶 四、DNA聚合酶 （一）大肠杆菌DNA聚合酶 （二）大肠杆菌Klenow片段 （一）大肠杆菌DNA聚合酶 （二）大肠杆菌Klenow片段 五、碱性磷酸酯酶 六、T4 多聚核苷酸激酶 七、S1核酸酶 八、反向转录酶 第三节 基因工程载体及其选择 一、大肠杆菌载体 二、酵母载体 三、植物载体 四、动物载体 一、大肠杆菌载体 （一）质粒载体 （二）噬菌体 （三）柯斯质粒载体 （一）质粒载体 （二）噬菌体 （三）柯斯质粒载体 二、酵母载体 （一）整合型载体（YIP） （二）复制型载体（YRP） （三）附加体型载体（YEP） （一）整合型载体（YIP） （二）复制型载体（YRP） （三）附加体型载体（YEP） 三、植物载体 四、动物载体 第四节 目的基因的制备 一、基因组文库法 二、cDNA文库法 三、化学合成法 四、聚合酶链式反应（PCR） 一、基因组文库法 二、cDNA文库法 三、化学合成法 四、聚合酶链式反应（PCR） 第五节 基因的克隆与检测 一、基因的克隆 二、重组克隆的筛选与鉴定 一、基因的克隆 （一）基因与载体的连接 （二）重组DNA导入受体细胞 （一）基因与载体的连接 1. 黏性末端连接 2. 平末端连接 3. 人工加尾连接 4. 人工接头连接 1. 黏性末端连接 2. 平末端连接 3. 人工加尾连接 4. 人工接头连接 （二）重组DNA导入受体细胞 1. 生物学方法 2. 物理学方法 3. 化学方法 1. 生物学方法 2. 物理学方法 3. 化学方法 二、重组克隆的筛选与鉴定 （一）利用表型特征进行筛选 （二）重组DNA电泳检测 （三）内切酶图谱鉴定 （四）利用核酸杂交进行鉴定 （五）利用聚合酶链式反应（PCR）技术鉴定 （六）免疫沉淀检测法 （七）DNA序列分析 （一）利用表型特征进行筛选 1. 抗药性标志的筛选 2. β-半乳糖苷酶系统筛选 3. 利用噬菌斑的形成进行筛选 1. 抗药性标志的筛选 2. β-半乳糖苷酶系统筛选 3. 利用噬菌斑的形成进行筛选 （二）重组DNA电泳检测 （三）内切酶图谱鉴定 （四）利用核酸杂交进行鉴定 （五）利用聚合酶链式反应（PCR）技术鉴定 (六) 免疫沉淀检测法 （七）DNA序列分析 第六节 外源基因的表达 一、外源基因正确表达的条件 二、外源基因在原核细胞中的表达特点 三、影响外源基因在原核细胞中高效表达的因素 四、外源基因在真核细胞中的表达特点 一、外源基因正确表达的条件 （一）启动子 （二）S-D序列 （三）起始密码子 （四）终止子 （五）表达产物的后加工 （一）启动子 （二）S-D序列 （三）起始密码子 （四）终止子 （五）表达产物的后加工 二、外源基因在原核细胞中的表达特点 三、影响外源基因在原核细胞中高效表达的因素 （一）启动子结构对表达效率的影响 （二）载体的选择 （三）S-D序列与起始密码子之间的距离 （四）转译起始相关序列对表达效率的影响 （五）转录终止区对外源基因表达效率的影响 （六）基因拷贝数对表达效率的影响 （七）翻译后的蛋白修饰与基因表达的关系 （八）提高表达蛋白的稳定性 （九）培养条件的控制对表达效率的影响 （一）启动子结构对表达效率的影响 （二）载体的选择 （三）S-D序列与起始密码子之间的距离 （四）转译起始相关序列对表达效率的影响 （五）转录终止区对外源基因表达效率的影响 （六）基因拷贝数对表达效率的影响 （七）翻译后的蛋白修饰与基因表达的关系 （八）提高表达蛋白的稳定性 （九）培养条件的控制对表达效率的影响 四、外源基因在真核细胞中的表达特点 第七节 基因工程在食品工业中应用 一、改良食品加工原料 二、改良微生物菌种性能 三、应用于食品酶制剂的生产 四、改良食品加工工艺 五、应用于生产保健食品的有效成分 六、利