第二次讨论第一题分析.pptVIP

制胶所用仪器 上样示意图以及注意事项 等电聚焦电泳 等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展。 等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。?这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”. 等电聚焦电泳原理 蛋白质是带有电荷的两性生物大分子，其正负电荷的数量随所处环境酸碱度的变化而变化。 等电聚焦（IEF）电泳就是在凝胶中加入两性电解质，从而构成从正极到负极pH逐渐增加的pH梯度，处在其中的蛋白分子在电场的作用下运动，最后各自停留在其等电点的位置上，测出蛋白分子聚焦位置的pH值，便可以得到它的等电点。 等电聚焦电泳原理 聚丙烯酰氨凝胶电泳 作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。 它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native）及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。 2D/MS 经典工作流程 细胞裂解 匀浆 除杂质 浓缩 定量 差异分析 双向电泳