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蛋白质的结构、功能及其分离纯化（II） 第三节 蛋白质的结构与功能的关系 各种蛋白质都有特异的生物学功能，而所有这些功能又是以其特异的结构为基础的。 一、蛋白质一级结构与功能的关系 (一)一级结构是空间构象的基础 形成β-折叠要求氨基酸的侧链较小，才能容许两条肽链或肽段彼此靠近 多个酸性或多个碱性氨基酸残基相邻，则妨碍α螺旋的形成。 因此，多肽链中氨基酸的种类及排列顺序决定了肽链的折叠和卷曲方式。 (二)一级结构与功能的关系 1．一级结构相似的多肽或蛋白质具有相似的空间构象及功能 例如，不同哺乳动物来源的胰岛素，都是由21个氨基酸残基的A链和30个氨基酸残基的B链组成。 在不同哺乳动物对比中，胰岛素的51个氨基酸残基中有24个残基是恒定不变的，它们的一级结构虽不完全相同，但与其三维结构形成有关的氨基酸残基却完全一致，且二硫键的配对和空间构象也极相似，因而都执行相同的调节糖代谢等生理功能。 2．关键部位氨基酸残基的改变会引起蛋白质空间构象的改变乃至功能的异常 分子病：基因突变引起的某个功能蛋白的某一个或几个氨基酸残基发生了遗传性替代从而导致整个分子的三维结构发生改变，功能部分或全部丧失。 例：镰状细胞贫血(sickle cell anemia) HbA(正常血红蛋白)β链的第6位为谷氨酸 Hbs(患者血红蛋白)的β链的第6位是缬氨酸 亲水侧链被非极性的疏水侧链所取代，在β6Val与β1Val之间出现了一个因疏水作用而形成的局部结构。这一结构能使脱氧HbS进行线性缔合，导致氧结合能力过低，使得整个红细胞扭成镰刀状，导致溶血性贫血。 空间构象发生改变，功能随之改变。 蛋白质的空间结构决定蛋白质的功能 蛋白质通常形成三级结构才有活性 空间结构相似的蛋白质功能往往相似 例如：肌红蛋白和血红蛋白 蛋白质空间结构的改变往往会造成功能的改变 例如蛋白质构象病：老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。 2. 变性因素 化学因素： 酸、碱、有机溶剂(如乙醇、甲醇、丙酮、乙醚等)、尿素、表面活性剂(如十二烷基磺酸钠)、生物碱试剂(如三氯乙酸)以及重金属离子等。 物理因素：加热、紫外线、x射线、超声波、高压以及剧烈振荡等。 3．变性的可逆性 复性(renaturation）若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。 复性方法：透析或超滤除去变性剂，或稀释 蛋白质变性后，空间构象严重被破坏，不能复原，称为不可逆性变性。 (二)变构——蛋白质活性调节方式 一个蛋白质的特定部位（调节部位）与它的配体(或其他蛋白质)结合后，蛋白质的空间结构发生改变，使它适合于功能的需要，这类变化称为变构效应或别构效应(allosteric effect)。 具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白(allosteric protein） 能引起蛋白质发生变构效应的物质称为变构效应物(allosteric effector ）。 H+、CO2、O2、ATP、AMP、CTP以及酶的底物等，也有某些生理活性物质如激素等。 血红素 (heme) 铁卟啉化合物 由4个吡咯环通过4个甲炔基相连成为一个环形，Fe2+居于环中央 Fe2+有6个配位键，其中4个与吡咯环的N配位结合，1个配位键和肌红蛋白的93位(F8)组氨酸残基结合，氧则与Fe2+形成第6个配位键，接近第64位(E7)组氨酸。 血红蛋白的变构效应 Hb与O2呈可逆结合，形成HbO2(氧合血红蛋白)。 HbO2占血液中总Hb的百分数称为氧饱和度，它随氧分压而改变的曲线(氧解离曲线)呈S形，提示Hb的四个亚基与O2结合有四个不同的平衡常数。当第一个亚基与O2结合后，促进第二、第三个亚基与O2结合，当第三个亚基与O2结合后，又大大促进第四个亚基与O2结合。 Perutz等利用x射线衍射技术，分析Hb和HbO2结晶的三维结构图谱，认为这种与O2结合的特征与其空间构象改变有关。 未结合氧时，Hb的α1/β1和α2/β2呈对角排列，结构较为紧密，称为紧张态(tense state，T态), T态Hb与O2的亲和力小。 随着O2的结合，四个亚基羧基末端之间的盐键断裂，使α1/β1和α2/β2的长轴形成15。的夹角，结构显得相对松弛，称为松弛态(relaxed state，R态，R态Hb与O2的亲和力大。 T态转变成R态是在逐个