基因工程的基本操作程序分析.ppt

一、目的基因的获取 1、目的基因： 主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）通过DNA合成仪用化学方法人工合成 （一）从基因文库中获取目的基因 1.什么叫基因文库？ 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，每个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 （一）从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，每个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 表达载体在重组质粒的基础上增加了启动子、终止子两部分结构 重组质粒与表达载体 重组质粒有目的基因、标记基因和复制原点三部分DNA片段。 总结： 基因工程的基本操作程序 1、获取目的基因 ★从基因文库：基因组文库、cDNA文库 ★利用PCR技术扩增目的基因 ★化学方法人工合成目的基因 ★表达载体的组成：目的基因、复制原点、启动子、终止子、标记基因 2、基因表达载体的构建 外显子：能编码蛋白质 内含子：不能编码蛋白质 启动子：启动转录 终止子：终止转录 基因结构 编码区 非编码区 基因的结构 1）关于cDNA的最正确的说法(??????) A同mRNA互补的单DNA????????????? B同mRNA互补的双链DNA??????? C以mRNA为模板合成的双链DNA???????? D以上都正确? C 练习巩固 2）下列获取目的基因的方法中需要模板链的是（ ） ①从基因组文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③从cDNA文库中获取目的基因 ④利用化学方法人工合成 A、 ① ② ③ ④ B、 ① ② ③ C、 ① ② ④ D、 ② ③ D 课后作业：预习基因工程第3、4步骤 并完成完美课堂第7—9页内容 三、将目的基因导入受体细胞 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在 受体细胞内维持稳定和表达的过程 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞法 受体细胞 农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 植物组织培养 基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞 花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 2、将目的基因导入动物细胞 方法：显微注射法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 转基因受精卵 转基因动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用菌：大肠杆菌 ③常用法：感受态细胞法 ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 表达载体 与感受态 细胞混合 用Ca2＋处理，增加细菌细胞壁的通透性 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 四、目的基因的检测与鉴定 青霉素抗性基因 四环素抗性基因 大肠杆菌 1、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 * 复习回顾 DNA重组技术的基本工具 1、限制酶 来源： 作用部位： 产生末端： 原核生物 磷酸二酯键 黏性末端、平末端 2、DNA连接酶 来源： 种类： 作用部位： 大肠杆菌、T4噬菌体 E?coliDNA连接酶、T4DNA连接酶 磷酸二酯键 3、运载体 （1）作用： （2）常用运载体： （3）运载体需具备的条件 将目的基因导入受体细胞 ⑴质粒 ⑵噬菌体 (3)动植物病毒 （1）能在宿主细胞复制并稳定保存 （2）有多种限制酶单一切点 （3）有某些标记基因 （4）对受体细胞无害、易分离 学习目标 1、基因工程包括几个步骤 2、获取目的基因有哪些方法 3、基因的结构包括哪些部分 4、表达载体组成以及如何构建表达载体 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将表达载体导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四