基因工程的基本操作程序上课用分析.ppt

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 归纳步骤 （二）、鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： * DNA复制主要在细胞内完成，以DNA的两条链为模板，根据碱基互补配对原则合成两个完全相同的DNA分子的过程。复制的条件是：以DNA双链作模板，以四种脱氧核苷酸为原料，需要线粒体供应，还需要多种酶，如解旋酶、DNA聚合酶等。 PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。它遵循的原理与DNA复制原理相同，条件是有一段已知目的基因的核苷酸序列和根据核苷酸序列合成的引物；原料是四种脱氧核苷酸，也需要多种酶，如DNA聚合酶。在PCR扩增仪上自动复制。 * PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）,它是利用DNA 双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断的加以复制，使其数量呈指数方式增加。因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。 * 专题1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 　 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库：概念见P9 2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 3、基因文库的构建方法 （1）基因组文库的构建 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 逆转录酶 DNA聚合酶 （2）部分基因文库（cDNA文库）构建 知识点一：1.原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成