基因工程制药分析.ppt

3、动物杂交法 许多基因由于进化过程中存在保守性而在人和其他物种中具有高度同源性，因此利用已知序列的其他物种的基因从构建的人基因组文库或cDNA文库中可以将目的基因调出。 生物技术制药 朱红艳 泰山学院生物与酿酒工程学院 4、功能克隆法 该法不适于在不知道基因相关功能信息的条件下有效地可隆新的基因。 可采用基因敲除技术、RNA干扰技术、酵母双杂交技术、高通量表达技术及流式细胞技术等手段，从基因水平、表达调控水平、蛋白质水平、细胞水平获得基因功能信息。 5、构建cDNA文库 通过表达序列标签(expressed sequence tags, EST)进行基因作图和基因组序列中编码序列的鉴别， EST能提供设计引物的足够信息，可以用PCR技术扩增基因组中特异片段，是一种有用的DNA位标。 6、差异显示技术的应用 用mRNA差异显示技术、减数PCR技术、差减杂交技术寻找新基因。 如通过正常组织和肿瘤组织某些基因和蛋白质的差异表达，寻找在肿瘤细胞中的高表达基因或沉默基因，从而推测其可能是癌基因或抑癌基因。 五、对已发现基因的改造 基因修饰技术和点突变技术进行基因新功能研究和确认； 蛋白质工程药物：更换活性蛋白关键氨基酸残基；增、删或调分子的某些肽段或结构域；嵌合性药物；修饰表达产物。 生物技术制药 朱红艳 泰山学院生物与酿酒工程学院 作 业 1、原核与真核生物mRNA的特征比较。 2、请列举5-6种非编码RNA及其功能。 3、请列举3-4种PCR的种类及其作用。 4、理想的质粒载体应具备哪些条件？ 生物技术制药 朱红艳 泰山学院生物与酿酒工程学院 * 粒细胞集落刺激因子 * genetic engineering又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。 * 转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。 * “发展高科技，实现产业化”（邓小平题词） 1986年3月，面对世界高技术蓬勃发展、国际竞争日趋激烈的严峻挑战，邓小平同志在王大珩、王淦昌、杨嘉墀和陈芳允四位科学家提出的“关于跟踪研究外国战略性高技术发展的建议”上，做出“此事宜速作决断，不可拖延”的重要批示。在充分论证的基础上，党中央、国务院果断决策，于1986年11月启动实施了高技术研究发展计划，简称863计划 * 基因工程药物就是利用基因工程技术生产的药品,在我国药品市场上,基因工程药品主要有基因工程乙肝疫苗,重组干扰素,重组人红细胞生成素等22种自主开发的基因工程药物. * 从供体细胞中分离出基因组DNA，用限制性核酸内切酶分别将外源DNA（包括外源基因或目的基因）和载体分子切开（切）； 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子（接）； 借助于细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞中（转）； 短时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其整合到受体细胞的基因组中（增）； 筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞（检）。基因工程的上游操作过程可简化为：切、接、转、增、检。 * 目的基因获得后，最主要的就是目的基因的表达。选择基因表达系统主要考虑的是保证表达的蛋白质的功能，其次是表达的量和分离纯化的难易。此阶段的工作主要在实验室内完成。 此阶段是将实验室的成果产业化、商品化，主要包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立，新型生物反应器的研制，高效分离介质及装置的开发，分离纯化的优化控制，高纯度产品的制备技术，生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造，电子计算机的优化控制等。 * 克隆真核基因常用方法：逆转录法和化学合成法。 * 核糖核酸酶H，是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase?H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。????特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。????用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。 * 质粒载体pBR322是研究得最多，使用最早且应用最广泛的大肠杆菌质粒载体之一。符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒；“BR”代表两位两位研究者