基因疫苗分析.ppt

基因疫苗 目录 简介 简介 基因疫苗的制作 基因疫苗的作用机制 基因疫苗的特点 基因疫苗的优缺点 基因疫苗的优缺点 基因疫苗的临床应用 基因疫苗的临床应用 基因疫苗的临床应用 基因疫苗的安全性 前景展望 * * 班级： 学号： 姓名： 2013年11月30日 简介 基因疫苗的制作 基因疫苗的作用机制 基因疫苗的特点及优缺点 临床应用与安全性 前景展望 基因疫苗(genetic vaccination)也称DNA疫苗，是利用基因重组技术将编码某种抗原蛋白的外源基因克隆在表达质粒上，再导入动物体细胞内，使外源抗原基因在宿主细胞中表达，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，产生抗体从而激活免疫力，以达到预防和治疗疾病的目的。 基因疫苗是继传统疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代新型疫苗。这种疫苗不但具有灭活疫苗的优点，而且尚未发现有逆转录的危险，因此在实践应用中越来越受到人们的重视，被誉为疫苗研究的第三次革命。就其研究进展而言，该疫苗具有很好的前景，如疟疾、乙型肝炎和人类免疫缺陷病毒HIV疫苗等已进入了临床试验。 1990年，Wolf等在研究体内基因转染时意外发现裸露的质粒DNA可以转染肌细胞，并能够表达其携带的目的基因，从而掀起了DNA疫苗的革命。 1992年，Tang等将表达人生长激素的基因质粒DNA导入小鼠表皮细胞，在小鼠血清中检测到了特异的抗生长激素抗体，并且在给予加强剂量的质粒后可使免疫反应增强。 1993年，Ulmer发现小鼠肌注射编码甲型流感病毒核蛋白(NP)的载体质粒后，可有效地保护小鼠抵抗另一亚型流感病毒的攻击。 1994年，在日内瓦召开的专题会议上将这种疫苗定名为核酸疫苗。 1998年，已有几种DNA疫苗—流感疫苗、艾滋病疫苗、乙肝疫苗等开始进行人体实验。 构建重组质粒 目的基因的导入 激活机制 基因疫苗一般由病原体抗原编码基因和以真核细胞 作为表达载体的质粒构成 获取编码抗原 的基因 抗原编码基因可以是完整的一 组基因或单个基因的cDNA；也可以是编码 抗原决定簇的一段核酸序列.总之,其表达产物为病原体的有效抗原成分, 可引起保护性免疫。 载体质粒多以pBR322 或pUC 质粒为基本骨架,带有细菌复制子(ori),标记 基因.目的基因.启动子 增强子 终止子等转录调控元件，信号序列保证其 能在大肠杆菌内高效稳定的复制,但缺乏在哺乳动物细胞内复制的能力。 质粒载体所带启动子多来源于病毒基因组, 如CMV（巨细胞病毒）、RSV (呼吸道合胞病毒)和鼠白血病病毒长臂末端重复序列(LTR)等启动子。此 类启动子具有较强的转录激活作用,能保证抗原基因在真核细胞内有效表 达并引起免疫应答。 1. 直接注射法 2.基因枪轰击法：将质粒DNA包被在金微粒子表面，由基 因枪高速打入3. 细菌或病毒携带法，即将其繁殖基因去除使其成为繁殖 缺陷植株，然后将质粒DNA转化，由于细菌不能繁殖故其自身裂解释放 出DNA。 基因疫苗激活免疫系统的详细机制尚不十分清楚.一般认为,含病原体抗原基因的核酸 疫苗被导入宿主骨骼肌细胞或皮肤细胞后,可在细胞内表达病原体的蛋白质抗原,经加 工后形成的多肽抗原可与宿主细胞MHCⅠ类和Ⅱ类分子结合,并被提呈给宿主的免疫 识别系统,从而可引起特异性体液和细胞免疫应答. 当疫苗的质粒DNA被导入机体后，抗原编码基因即在质粒所带强启动子的作用下表达抗原蛋白，随后被降解成8-12个氨基酸的短肽，这些短肽含有不同的抗原表位，来源于胞液的和囊液的抗原表位则分别与MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子结合，并呈递到细胞表面。与MHC-Ⅰ类分子结合的短肽激活CD8+T细胞（Tc），与MHC-Ⅱ类结合的短肽则激活CD4+T细胞（Th）。而分泌到细胞外的抗原则为带有相应抗体的B细胞捕捉，并在T辅助细胞分泌淋巴因子的刺激下转化为浆细胞，大量分泌抗体。也就是说当直接将DNA注射给患者，患者自身的细胞便产生免疫球蛋白，患者成了一个暂时的“疫苗工厂”，制造抗原并产生对感染的保护性免疫应答。 基因疫苗能诱导细胞免疫和体液免疫。 基因疫苗消除导入可能与减毒疫苗相关的强毒力病毒的危险性。 基因疫苗使用一次，即能产生长期免疫力，无须增加剂量，并可提高依从性。 基因疫苗多个病原体的基因可装在同一个质粒上，减少了疫时多次注射的不适。 基因疫苗可以干粉形式保存数年，且仍保持起活性。 可诱导相应的免疫应答：DNA在自身细胞中可表达目的抗原，其递呈过程与自然感染十分相似 安全：相对减毒活疫苗所存在的潜在感染风险，DNA疫苗安全无副作用 稳定：DNA的理化性质比较稳定，体外不易降解，便于储存和运输 制备简便、价格低廉：培养细菌可大量提取质粒，生产成本远远低于其他类