三、质粒与载体.pptVIP

质粒的主要类型 Summary of ColE1 replication control 求职应注意的礼仪 求职时最礼貌的修饰是淡妆 面试时最关键的神情是郑重 无论站还是坐，不能摇动和抖动 对话时目光不能游弋不定 要控制小动作 不要为掩饰紧张情绪而散淡 最优雅的礼仪修养是体现自然 以一种修养面对两种结果 必须首先学会面对的一种结果----被拒绝 仍然感谢这次机会，因为被拒绝是面试后的两种结果之一。 被拒绝是招聘单位对我们综合考虑的结果，因为我们最关心的是自己什么地方与用人要求不一致，而不仅仅是面试中的表现。 不要欺骗自己，说“我本来就不想去”等等。 认真考虑是否有必要再做努力。 必须学会欣然面对的一种结果----被接纳 以具体的形式感谢招聘单位的接纳，如邮件、短信 考虑怎样使自己的知识能力更适应工作需要 把走进工作岗位当作职业生涯的重要的第一步，认真思考如何为以后的发展开好头。 Thank you 由于pSUP204质粒和RP4带有不同来源的复制原点(ori)，属于不同的不相容质粒。因此可先通过转化方法将它们共同导入大肠杆菌细胞(HB101)。 当带有pSUP204/RP4双质粒的大肠杆菌HB101菌株与受体菌(如根瘤菌)杂交时, pSUP204就能以高频率转移到受体菌中。与F质粒和ColE1质粒共存时的转移一样,～85%的接合子同时含有pSUP204和RP4两种质粒,～15%的接合子只含有pSUP204质粒，这就是所谓的双亲杂交。 所谓三亲杂交就是将pSUP204和RP4分别导入大肠杆菌细胞(HB101)，然后将HB101(pSUP204)、HB101(RP4)及受体菌三个不同的菌株混合时, RP4可以转移到 HB101(pSUP204)菌株中。接着pSUP204在RP4的诱动下,从HB101转移到受体菌，这样就完成了质粒的转移。 (2) 转移区(tra)整合到染色体上的接合转移系统 一般将整合有自主转移质粒(如RP4质粒或其衍生质粒)的大肠杆菌供体菌叫做诱动菌株。大肠杆菌S17-1、SM10及S68-7就是含有RP4或其衍生质粒的诱动菌株. 在进行接合转移时，先将可移动质粒载体如pSUP204通过转化导入诱动菌株(如大肠杆菌S17-1)，然后将含有pSUP204的S17-1菌株与受体菌混合，就能使pSUP204从大肠杆菌向受体转移。这种方法也属于双亲杂交。 3.质粒的稳定性 (细胞分裂中的质粒分配) 在细胞分裂过程中发生的质粒不平均的分配, 是导致 质粒不稳定性的重要原因。 要使质粒能够保持稳定的遗传,至少需要满足下面两 个方面的条件:第一是每个世代每个质粒平均都必须 至少发生一次复制；第二是当细胞分裂时,复制产生 的质粒拷贝必须平均分配到两个子细胞中去。 质粒分配到子细胞的途径可分成随机分配 (random distribution)和主动分配(active distribution) 两种不同方式。 主动分配的机理 对低拷贝质粒而言，则需要某种特定机制，将细胞分裂与质 粒复制协调起来，以保证每个细胞至少获得一个拷贝。如：F R1和P1。 这些质粒的稳定性：(1)质粒结构中还存在编码主动分配体系 的par区 。(2)质粒编码的致死蛋白来抑制不含质粒的分离子 Par区,又叫做分配区(partition regions)或分配座位(partition locus) 是指在细胞分裂过程中使质粒拷贝数均等的分配到子 细胞中的质粒DNA序列。 在F质粒中par区是同复制起点紧密相邻的，而在R1质粒中则 是远离其复制起点。质粒的复制与分配是分开独立进行的。 在F质粒中，par区由sopA和sopB两个基因及sopC区组成,这 三个因素是质粒分配的基本因素,其中sopA和 sopB 叫做反式 作用基因(trans-acting genes)编码反式作用蛋白,sopC叫做顺 式作用位点(cis-acting site)。 顺式作用位点sopC由12个43 bp的正向重复序列组成,在每个 43 bp的正向重复序列中,又有一对7 bp的反向重复序列。 SopC区的功能类似于真核染色体上的着丝粒,所以 sopC区也 叫类着丝粒位点(centrmere-like site)。 反式作用蛋白SopB与顺式作用位点sopC区结合,形成蛋白-核酸 复合体,称为分配复合体(partition complex),参与质粒的分配。 质粒DNA在位于细胞中央的复制体(replisome)的作用下进行复制。质粒复制后,分配蛋白与类着丝粒位点结合形成分配复合体。 然后,一种尚未知的结构很快地将质粒拷贝移向细胞的两极,使复制后的质粒DNA均等的分配到两个子细胞中。接着可能是在分配蛋