蛋白质组学及技术介绍概要.pptVIP

蛋白质组学的应用 疾病研究 植物学 药物研究 食品科学 遗传病学 微生物学 在疾病及药物研究中的应用 1.发现新的疾病标志物，鉴定疾病相关蛋白质作为早期临床诊断标志。 例如：Lei等通过2-DE和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱等蛋白质组学相关技术对膀胱癌患者的尿蛋白进行分离鉴定，获得14个差异表达的蛋白质，这些差异表达的蛋白可能是诊断和检测膀胱癌的潜在尿标志物。 在疾病及药物研究中的应用 2.探索疾病的发病机制和治疗途径。 例：Polprasert等应用蛋白质组学方法对遗传性球形红细胞增多症的红细胞膜蛋白变化进行研究，分离鉴定出56个差异表达的蛋白质，通过蛋白质网络分析出包括细胞死亡、细胞循环及遗传性和血液性紊乱3个HS相关的重要网络，为进一步研究和了解HS相关的发病机制提供了参考。 在疾病及药物研究中的应用 3.研究膜蛋白及膜相关蛋白 Liu等利用比较膜蛋白组学方法对H5N1病毒分别感染6,12,14h的人肺腺癌细胞A549进行蛋白分析鉴定，得到24个差异表达的蛋白质，其中57%为膜蛋白或膜相关蛋白，通过siRNA技术鉴定出与病毒增殖相关的几种蛋白质。 在疾病及药物研究中的应用 4、为快速，特异，高通量的药物研究提供了技术支持。 Lin等应用蛋白质组学技术对阿霉素处理的人子宫癌细胞的蛋白表达变化进行研究发现，有 37 种差异表达的蛋白质，为阿霉素抗性的子宫癌细胞的治疗提供了诊断和治疗标志物。 蛋白质组学的研究技术 蛋白质分离技术：双向凝胶电泳（2DE），双向荧光差异电泳（2D-DIGE），等电聚焦电泳（IEF）,液相色谱。 多维色谱（MDC），多维液相色谱（MDLC）． 蛋白质鉴定技术 一级质谱：根据离子源的不同，分为基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和电喷雾质谱（ESI- MS）。二级质谱： 肽质量指纹图谱（PMF）。 新技术：稳定同位素特征标签生物质谱(SIAMS) iTRAQ 定义：同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ) 技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。 原理：iTRAQ 技术采用4种或8种同位素编码的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，而后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。 仪器 技术特点 荧光差异凝胶电泳 原理 在二维电泳的基础上进行荧光标记 特点 DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异，统计学可信度达到95%以上。 仪器 荧光差异凝胶电泳系统Ettan DIGE 2D 试剂 1.样品标记 （1）染料 Cy2,Cy3,Cy5 与蛋白的赖氨酸的epsilon-氨基反应，产生三种带正电荷的荧光基团，在不同波长光激发下产生荧光。 2.一相等点聚焦 （2）IPG胶条水化液 （3）分离胶缓冲液 （4）平衡缓冲液 （5） 溴酚蓝溶液 3.二相SDS蛋白质组学 概念 蛋白质组是在一个细胞的整个生命过程中由基因组表达的以及表达后修饰的全部蛋白质。 蛋白质组学是蛋白质组概念的延伸。是蛋白质的规模化研究，从蛋白质水平和生命本质层次上研究和发现生命活动的规律和重要生理、病理现象的本质，揭示基因活动的动态表达。 蛋白质水平的分析不仅为生物分子体系提供最有效的实时分析模型而且也获得了DNA和RNA水平上不易获得的信息。 研究内容 蛋白质的研究内容主要有两方面： 1、结构蛋白质组学：主要是蛋白质表达模型的研究，包括蛋白质氨基酸序列 分析及空间结构的解析种类分析及数量确定; 2、功能蛋白质组学：主要是蛋白质