第八章核移植技术与动物克隆概要.ppt

第八章 核移植与动物克隆 克隆 核移植 正确看待克隆 关于克隆人 克隆：用无性方式产生后代群体。是指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体 技术水平： 分子克隆(molecular clone)：即DNA克隆 细胞克隆 个体克隆（动物或植物） 细胞克隆： 细胞水平上的克隆。如杂交瘤细胞克隆。 个体克隆：动物（植物）克隆 动物克隆：通过无性繁殖的手段，获得的遗传背 景一致的动物群体。 细胞核移植技术 —— 核心技术 卵裂球培养技术 胚胎分割技术 核移植技术 概念: 利用显微操作仪将外源细胞的核移入去核卵母细胞中，经人工活化和体外培养后，再移植入代孕母体内，使其发育为含有与供体细胞相同遗传物质的个体。 现在一般将细胞核移植技术得到的动物称之为克隆动物，是目前动物克隆的主要方法。 核移植的发展历史 1952年，美国人罗伯特?布里格斯和T.J.金对豹蛙发育到囊胚期的胚胎细胞做移核试验，成功地获得了一个可以摄食的豹蛙幼体。 1958年-1962年，英国剑桥大学利用爪蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾。 1962年，童第周进行鱼类不同亚科间的核移植获得成功。 20世纪80年代，哺乳动物克隆技术迅速发展。 1981年,Illmensee和Hopper首次报道将鼠ICM细胞核移植到去核卵母细胞,经过体外培养，有34%的重组胚胎发育为桑椹胚。这种胚胎移入受体后，19%发育产仔。这是在哺乳类第一次用胚胎细胞进行核移植获得成功。 1986年,Willadsen首次报道在绵羊，采用去核的成熟卵母细胞做核受体与8-细胞的单个分裂球重构产生胚胎，首次应用电融合的方法克隆出一只小羊。 1997年2月17日，英国科学家Wilmut等报道，利用体细胞核移植技术成功获得了克隆绵羊“多利”(Dolly)。 2000年6月，西北农林科技大学成功获得成年体细 胞克隆山羊，标志着我国动物体细胞克隆技术的 崛起。 2001－2004年，山东莱阳农学院、中科院动 物所、中国农业大学等相继获得几十头体细胞克 隆牛出生。 2003年9月中科院动物所与法国科学家合作，发明 了能够精确控制大鼠卵细胞自发活化的专利技 术，在国际上率先成功克隆出大鼠。 这些成果表明我国在动物体细胞克隆的各项技术指标已达到国际先进水平，在一些技术方面居国际领先水平。 在异种克隆方面，我国也有一些领先于国际水平的方面，例如中科院动物所和西北农林科技大学都获得大熊猫异质克隆囊胚。将大熊猫的体细胞核植入去核后的兔卵细胞中，成功地培育出了大熊猫的早期胚胎。  胚胎细胞核移植 将一个多细胞胚胎的细胞核, 通过显微手术和细胞融合的方法, 移植到一个去核卵母细胞中, 构成新胚胎(克隆胚胎) , 然后移植给受体, 获得与核供体胚胎基因型相同的后代(克隆动物) 的生物技术。 具有全能性，以其作为核供体进行核移植较容易成功。是克隆哺乳动物供核细胞最佳来源。 成功的获得了克隆鼠、克隆羊、克隆猴等。 体细胞核移植 是指成体动物细胞核经显微手术和细胞融合的方法，移植到去核的卵母细胞内，或将体细胞核直接注入到去核卵母细胞质中, 重新组成胚胎并使之发育乃至产生子代。 诱导已分化的细胞进入G0期，恢复其全能性。 “血清饥饿法”恢复体细胞核全能性。 绵羊“多莉” 整个克隆过程如下： 核移植技术的一般操作程序 核受体的处理和制备 核供体的处理和制备 核移植 重组胚的培养 胚胎移植 核受体的准备 核受体：去核卵母细胞 超排卵处理，获得体内成熟的卵母细胞卵母细胞 来源 收集卵巢，吸取卵丘－卵母细胞复合 体，体外培养成熟 卵母细胞去核 是否完全除去卵母细胞中期染色体，会影响克隆胚胎的发育能力, 如果去除不完全, 可导致克隆胚胎染色体的非整倍性, 造成卵裂异常、发育受阻和胚胎早期死亡等。 常用去核方法有: ①盲吸法: 用微细玻璃管在第一极体下盲吸, 将 第一极体、部分胞质(含中期染色体) 除去。 ②半卵法: 在透明带上做一切口, 用微细玻璃管吸 去一半细胞质至另一空透明带内, 即将卵母细胞 分为两半, 然后用Hoechst33342 染色确定不含 染色体的一半为胞质受体。 ③功能性去核法: 使Hoechst3342与卵母细胞DNA 结合后, 用紫外线照射, 使核丧失功能。 核供体的准备 条件： 核供体细胞具备完整二倍体。 供体核在受体细胞质的作用下，产