选修基因工程概述技术方案.ppt

定向基因改造设想 基因工程的理论铺垫 艾弗里：证明ＤＮＡ是遗传物质 沃森和克里克：阐明ＤＮＡ双螺旋结构 尼伦贝格：破译遗传密码 限制性核酸内切酶和DNA连接酶等工具酶、质粒等载体和逆转录酶的发现，则直接促使了基因工程的诞生。 科恩和博耶的实验之后不久，有科学家将第一个真核生物——非洲爪蟾的基因导入大肠杆菌，使大肠杆菌产生非洲爪蟾的rRNA，这表明真核生物的基因可以在原核生物中得以表达。 1977年美国科学家使生长激素抑制素基因在大肠杆菌中成功表达 1978年，人胰岛素在大肠杆菌中合成 1979年，人生长激素基因在大肠杆菌中得以表达 1980年，人干扰素基因在大肠杆菌成功表达 1982年，美国科学家帕米特，采用显微注射法得巨型小鼠 磷酸二酯键 什么叫平口末端？ 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶在原核生物中的作用 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是原核生物的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，达到保证自身的安全的目的。 为什么细菌中限制酶不剪切本身的DNA？ 因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解；含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 用同一种限制性酶处理不同DNA片段，会形成同样的黏性末端，可进行重组。 DNA连接酶 E·coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 DNA连接酶 区别： E·coli DNA 连接酶 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平口末端之间进行连接 T4 DNA 连接酶 既可“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平口末端，但连接平口末端之间的效率比较低 外源基因进入受体细胞的运载体 常用运载体：质粒、 λ噬菌体衍生物、 动植物病毒 质粒： 存在：主要存在于细菌的染色体以外。 特性：是很小的双链环状DNA分子，在细胞染色体外能够自我复制。 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 作为运载体的条件： （1）必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去。 （2）必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3）必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA分子的辨认和筛选。 （4）必需是安全的，不会对受体细胞有害，也就是能够安全地“借居”在受体细胞中。 （5）分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 基因文库的构建模式图 用限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子，即基因表达载体。 　　①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口； ②用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端； ③将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，使两者结合成重组质粒。 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法（感染双子叶植物和裸子植物，对大多单子叶植物没有感染力） 基因枪法（常用于单子叶植物） 花粉管通道法（转基因抗虫棉） 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（“超级小鼠”） 将目的基因导入微生物细胞 导入大肠杆菌方法：先用Ca2+处理，使其转为感受态细胞。再将重组载体与感受态细胞混合。 不同种类的受体细胞 1.对于植物而言，受体细胞可以是受精卵和体细胞 2.对于动物而言，受体细胞一般是受精卵。受精卵作为受体细胞具有体积、易操作、经培养可直接表达性状的优点。 3.微生物细胞作为受体具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少等优点。 1.以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键 C 练习 2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D