课题 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数概要.ppt

尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 二、课题目标 1、从土壤中分离产生脲酶的细菌 2、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 （一）筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐高温酶。 2、活菌计数法 * * 专题3 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 细菌脲酶 一、课题背景 三、研究思路 （一）筛选菌株KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 选择培养基实例 (1) 加入青霉素可以分离出混杂在细菌中的酵母菌和霉菌； (2) 加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌； (3) 培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物； (4) 培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物； (5) 培养基中的氮源只有尿素时，理论上只有能合成脲酶的 微生物才能在上面生长。 D c 1 ．显微镜直接计数法 (1) 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显 微镜 下计算一定容积的样品中微生物数量。 (2) 方法：用计数板计数。 (3) 缺点：不能区分死菌与活菌。 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； （二）统计菌落数目： (1) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板 上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2) 计算公式：每克样品中的菌株数＝ (C÷V)M 其中 C 代表 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V 代表涂布平板时 所用的稀释液的体积 (mL) ,M 代表稀释倍数。 【例】若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的稀释液体积为0.1ml,稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数约为 。 8×108 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目 。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 30—300 低 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。 D A 土壤取样 → 样品稀释和涂布 → → 微生物的 培养 → 观察并记录结果 → 细菌计数 三、实验设计(以活菌计数法为例) 制备培养基 （一）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入