血清学实验教学技术方案.ppt

血清学实验原理及应用 血清学实验的建立及概念 1883年 俄国动物学家 发现白细胞吞噬作用 1890年 德国医师、日本学者 发现白喉抗毒素 1894年 比利时血清学家 发现补体 1896年 H. Durham 发现凝集反应 1897年 R. Kraus 发现沉淀反应 1900年 K. Landsteiner 发现ABO血型 1900年 J. Bordet 发现补体结合反应 1900′s 英国医师 发现调理素 1945年 R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受 1948年 C.Snell 发现组织相容性抗原 1953年 R.Billingham 成功进行了人工耐受试验 1956年 Witebsky 建立自身免疫动物模型 1980′s~ 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究 抗原抗体结合反应 血清学实验的基本原理 分子表面结合（非共价键结合） 亲水胶体转化为疏水胶体 血清学反应的特点 特异性 可逆性 比例性 反应的阶段性 影响血清学反应的因素 抗原抗体本身的性质 电解质 酸碱度 温度 血清学反应的优缺点 不需要特殊仪器设备，操作简便。 灵敏度低，绝大多数为定性测定。 血清学试验的应用 传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、变态反应性疾病的确诊 疫苗免疫效果监测 人群免疫水平监测 生物活性物质的超微定量、物种及微生物鉴定和分型 基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分子生物学研究的重要手段 抗原抗体反应类型 抗原抗体反应类型 ELISA的基本原理 ELISA---enzyme-linked-immunosorbent assay 以酶作为标记指示物、以抗原抗体反应为基础的固相吸附测定方法。 固相支持物及包被的抗原或抗体、 酶标记的抗体或抗原、 酶反应底物。 ELISA测定常用模式 双抗体夹心法测抗原 双抗原夹心法测抗体 竞争法测抗原 竞争法测抗体 间接法测抗体 固相捕获法 酶免疫试验的优点和局限性 优点 特异性高 灵敏性强 操作简便 试剂稳定 对环境无污染 局限性 影响及干扰试验因素多 定性ELISA试验中cutoff值 “灰区”样本的确定 血清学试验的发展趋向 反应的微量化和自动化 方法的标准化和试剂的商品化 技术的敏感、特异和精密化 检测技术的系列化 方法简便快速 参考文献 刘辉主编.免疫学与免疫学检验（全国医学高等职业技术院校规划教材）. 北京：人民军医出版社,2006. 李金明主编.临床酶免疫测定技术.北京：人民军医出版社,2005. * * 建立细胞免疫学说 免疫学（抗感染免疫） 血清学实验 建立体液免疫学说 免疫学 免疫学（分子免疫学） 血清学反应的实质 在体内表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤。 在体外，由于参与反应的抗原物理性状以及反应条件的不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。 水化膜 电荷 特异性结合阶段 可见反应阶段 检测金颗粒沉淀 金标免疫技术 检测发光强度 发光免疫技术 检测酶催化的显色反应 酶标记免疫技术 免疫标记技术 检测放射性强弱 放射免疫技术 检测荧光 荧光免疫技术 毒素中和试验 观察毒性丧失情况 病毒中和试验 中和反应 观察或测定溶血现象 补体结合试验 补体溶血试验 补体参与的反应 观察沉淀峰或沉淀弧 琼脂电泳技术 观察沉淀线或沉淀环 琼脂扩散试验 沉淀反应 观察沉淀环 液相沉淀试验 冷凝集素试验 抗球蛋白试验 协同凝集试验 肉眼或放大镜或显微镜观察出现的凝集现象 凝集抑制试验 间接凝集试验 直接凝集试验 凝集反应 判断方法 实验技术 反应类型 检测金颗粒沉淀 金标免疫技术 检测发光强度 发光免疫技术 检测酶催化的显色反应 酶标记免疫技术 免疫标记技术 检测放射性强弱 放射免疫技术 检测荧光 荧光免疫技术 毒素中和试验 观察毒性丧失情况 病毒中和试验 中和反应 观察或测定溶血现象 补体结合试验 补体溶血试验 补体参与的反应 观察沉淀峰或沉淀弧 琼脂电泳技术 观察沉淀线或沉淀环 琼脂扩散试验 沉淀反应 观察沉淀环 液相沉淀试验 冷凝集素试验 抗球蛋白试验 协同凝集试验