肿瘤细胞耐药性与Keap1Nrf2P62的研究进展重点解读.docVIP

肿瘤细胞耐药性与Keap1/Nrf2/P62的研究进展 【摘要】 肿瘤细胞耐药性是导致化疗失败及愈后不良的重要原因。在肿瘤治疗中，化疗药物作用于肿瘤细胞 Keapl/Nrf2通路, Nrf2及其介导的下游二相抗毒酶表达，Keapl-Nrf2通路Keapl的基础水平和Nrf2的基本活性，对肿瘤细胞耐药都具有重要意义。本文对肿瘤细胞耐药性与P62/Keapl/Nrf2通路肿瘤是肿瘤化疗失败的关键因素。未接触药物时已存在获得性接触药物后活性氧(ROS)ROS是有氧代谢产生的一类活性含氧化合物的总称，主要包括超氧阴离子羟自由基过氧化氢和单线态氧等，[1]。在肿瘤的发生发展和恶化过程中，许多内源和外源性机制参与其中：肿瘤基因的激活、线粒体功能失常以及代谢异常等肿瘤细胞内部因素均可导致肿瘤细胞内ROS 水平的升高。最近，有学者指出细胞内ROS水平轻度增高，能降低细胞内P-gp的水平；而大量ROS能引起细胞内的氧化应激，从而增加Mdr的表达，进一步增加P-gP的产生，肿瘤细胞获得耐药性状。在肿瘤细胞中，致癌基因一方面增加 ROS 的产生，当处于持续高水平的ROS诱导状态下，肿瘤细胞提高自身氧化应激水平从而获得ROS抵抗性，促肿瘤细胞存活，产生耐药性，以此来促进肿瘤细胞的增殖；另一方面刺激一些ROS 清除酶的表达发挥抗氧化机制，来最大程度上降低氧化损伤。通过激活 ROS 清除的酶系统来抵抗 ROS 的生成是肿瘤细胞抵抗氧化还原稳态的主要机制[2]。肿瘤细胞抵抗氧化应激的平衡机制会诱导细胞内多种转录因子和信号通路发挥促细胞存活作用，并进一步导致肿瘤细胞耐药性的产生[3]，包括自噬、Keap1/Nrf2通路、Hif-1、硫氧还蛋白和 GSH 抗氧化系统等。例如，肿瘤细胞可以通过激活转录因子 HIF-1来应对 ROS 应激，增加糖酵解，促进细胞的存活[4]。化疗药物作用，肿瘤细胞ROS升高导致错折叠蛋白堆积引起内质网压力应激，肿瘤细胞通过诱导自噬降解错折叠蛋白，使得肿瘤细胞存活并产生耐药性[5]。在顺铂耐药的卵巢癌SKOV3 DDP细胞中, Keap1/Nrf2/自噬通过诱导下游相关的转录因子表达，从而避免了ROS刺激引起的细胞凋亡，细胞存活，获得耐药性[6]。因此，保持 ROS 的相对平衡对正常细胞的生长和生存十分关键,同时也表明破坏这种平衡机制可以成为治疗肿瘤的一个好方法。 2.肿瘤耐药性与Keap1/Nrf2通路 Keap1/Nrf2通路是细胞内防御氧化清除 ROS 的一个重要机制[7]。人体通常会暴露在各种ROS刺激的氧化应激环境中，持续的氧化应激会造成细胞结构：脂质、蛋白质、核酸的损伤等，这些氧化损伤会诱发人体产生炎症、心血管疾病、神经变性性疾病甚至癌变[8]。细胞内参与抗氧化反应调节有三个主要细胞成分:Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1 (Keap1), 核F2相关因子 (Nrf2), 抗氧化反应原件 (ARE)[9][10]。 Keap1/Nrf2/ARE通路调节细胞抵抗氧化应激，保持细胞维持在相对平衡状态，Nrf2为 ARE介导基因表达的主要调控者，Keap1也被称为INrf2,对2发挥负调节作用[11]/ARE通过[12]。 Nrf2和它的胞质接头蛋白细胞抗氧化反应的调节者[13]。在正常情况下，Keap1将Nrf2固定在胞质的肌丝上，联合泛素化连接酶将Nrf2水解；一旦细胞受到亲电子或氧化物攻击，Keap1就会释放Nrf2入核，稳定的Nrf2进入核内与ARE原件结合，从而激活下游GAPDH、GCLC、NQO1、HO-1等一系列二项解毒酶的表达[14]。Keap1是如何释放Nrf2的具体机制还没有定论：1）Keap1与蛋白酶体泛素化连接酶连接，通过调节泛素化连接酶决定是否释放Nrf2 [15]。2）亲电子物质作用，Keap1与泛素化连接酶分离，使Nrf2不能被泛素化水解，Nrf2增多[16]。3）在人体受到亲电子或氧化物攻击时，Keap1中第27个半胱氨酸中的两个或更多个半胱氨酸残基可能作为次反应的关键感应部位调节Nrf2的表达，Nrf2会上调二项抗毒酶的表达。氧化物质通过与Keap1半胱氨酸残基反应，从而激活Nrf2通路[17]。Nrf2水平的促进癌症细胞的存活，从而有助于肿瘤细胞性[18]。Adam Lister[19]。简而言之，肿瘤细胞为了抵抗化疗药物的攻击，其Keapl-Nrf2通路多处于过度激活状态高表达的Nrf2被认为是肿瘤耐药的标志肿瘤细胞[20]。P62/SQSTEM1偶联于微管相关蛋白轻链3（LC3-II），作为一种调节因子参与自噬体的构成，在自噬的中、晚期被降解[21]，细胞内整体p62水平的表达与自噬活性存在负相关。在自噬开始阶段，细胞将自身的蛋白质，细胞器和细胞质包裹进自噬小体内，这些自噬体通过与溶酶体结合