肿瘤相关分子在癌进展中的多相调控机制重点解读.doc

项目名称： 肿瘤相关分子在癌进展中的多相调控机制 陈志南 中国人民解放军第四军医大学 2009.1至2013.8 陕西省科技厅 总后勤部卫生部 本项目针对肿瘤转移新分子，展开以下研究 一、 （1）癌基因及抑癌基因的分子平衡研究：选择癌基因如OPN、ras、myc等与抑癌基因如HTPAP、p53、PTEN等，进行分子间信号转导网络平衡研究，了解这些基因突变、异常表达及产物的异常激活与细胞周期和肿瘤侵袭转移的关系；（）转移相关分子的功能研究：以已建立的转移模型与细胞系为载体，结合生物信息学方法，建立系统而有效的方法对筛选到的肿瘤转移相关基因进行鉴定。将利用基因克隆、RNA干扰、基因转染技术等结合免疫荧光显微术、流式细胞法、免疫沉淀和印迹、Transwell法、动物转移模型等手段，确定相关基因在肿瘤转移中的作用，发现关键的基因，阐述其作用机理，并评估其作为阻滞肿瘤转移的新药筛选靶标的价值；（）转移相关分子的调控网络：应用模式生物、基因补偿、基因剔除、磷酸化、甲基化、糖基化、双荧光酶、双杂交等技术，结合高通量技术及生物信息学技术探索转移相关分子调控网络；（）转移的分子干预：结合前一部分的基因/蛋白质组学研究发现，确立23个肝癌特异或可调控的具备功能的靶分子作为攻击目标（如OPN等），设计特异性的siRNA、反义核酸、或小分子多肽等，以本建立的转移模型和转移细胞系进行验证。完成临床前研究。 二、 拟采用分子病毒学、肿瘤免疫学和肿瘤细胞生物学等研究手段，在基因水平、蛋白水平、网络调控、实验动物和临床标本等多个层面研究肿瘤发生/发展和“炎癌链”中的关键调控基因和蛋白。 （1）探讨肿瘤免疫微环境对肿瘤转移的作用机制，明确炎癌链关键调控因子：研究乙型肝炎病毒x基因整合入肝细胞基因组与肝癌发生和转移的关系，揭示x基因在基因组中整合的规律，发现新的整合脆点研究X蛋白的反式激活作用，探讨X蛋白与survivin蛋白的协同致癌作用，并阐述其分子机制。深入探讨炎癌链的关键调控因子为临床早期诊断提供实验依据。、 （1）HAb18G/CD147、NDRG2等关键信号分子的相互作用：生物大分子相互作用分析系统（Biacore）蛋白分子核磁共振（NMR）分析分子间相互作用可能的结构域，确定关键结合位点氨基酸残基。位点突变后确定其结合活性； 四、 （1）肿瘤细胞周期调控关键分子研究：以RNAi、单抗封闭及check-in过表达等技术研究肿瘤相关分子HAb18G/CD147等对肿瘤细胞周期的影响，并进一步鉴定其下游调控的细胞周期相关蛋白，明确其信号转导通路；（2）研究细胞间信号分子（如CyPA）对肿瘤细胞周期功能的影响，并结合结构生物学和生物信息学预测结果，采用基因突变等方法，分析信号分子的相互作用关键残基位点；（3）筛选鉴定新型细胞周期调控相关的肿瘤转移关键分子，进行联合药物靶点细胞周期捕获研究；（4）鉴定CD146分子的天然配体，并系统研究其与CD146分子的相互作用机理及生物学功能，研究对CD146分子参与信号传导过程的逆向调控及抑制，丰富肿瘤血管生成机制的基础理论研究，为肿瘤血管靶向治疗提供新的思路。（5）将本课题组前期开发的KH903 VEGFR融合蛋白序列及其shRNA表达框架插入到已制备的AFP、hTERT和COX-2调控的肿瘤裂解病毒，构建一种新型的抗新生血管生成的肝癌靶向性肿瘤裂解病毒，用于高效表达融合蛋白并有效抑制肿瘤组织的新生血管生成，同时能特异性地抑制VEGF/VEGFR的表达、并裂解肿瘤细胞，为临床肿瘤病人提供一条全新的肿瘤病毒基因治疗思路。 、 在前期研究基础上，进行HAb18G/CD147、OPN、HTPAP等分子在乳腺癌、肝癌、肺癌的预警、早期诊断、检测定位、治疗反应、预后判断、复发监测等方面作为肿瘤标志物的临床评估，并探讨其机制。采用免疫组化方法，不同分期的乳腺癌、肝癌组织、癌前病变组织、正常组织检测，；用分子原位杂交、微切割、RT-PCR技术，确定mRNA在组织中的，结合免疫组化结果进行分析统计学，。、 （1）通过筛选抗原性强、特异性高的肿瘤抗原，构建携带靶抗原的rAAV载体，感染肿瘤患者自身外周血单个核细胞来源DC，诱导DC活化产生靶抗原特异性CTL，开展临床免疫治疗，为晚期肿瘤患者提供一种更为有效的免疫治疗方法，以期提高生存率，延长生存期。计划在3年内完成500-600例恶性肿瘤患者的临床研究，随访生存指标，全面评价rAAV-DC基因免疫治疗的疗效，并初步建立一套完整的DC临床免疫治疗疗效评价标准。（2）研究HAb18G/CD147分子参与肝纤维化发生机制：明确HAb18G/CD147分子表达和HSC活化统计学相关性。在临床肝硬化、肝癌组织中进行验证。研究HAb18G/CD147分子对活化HSC的细胞生物