人乳头瘤病毒幻灯片.pptVIP

* 采样流程：1.暴露宫颈 2.用棉式子将宫颈口过多的分泌物擦去（注意不要用消毒液）3.宫颈刷置于宫颈口，顺时针转3-5圈 4.刷头放入洗脱管，沿折痕折断宫颈刷 5.旋紧管盖 采集的样本在室温放置不超过4小时，4℃保存不超过24小时，-20℃保存不超过3个月。样本应避免反复冻融 。如收样送检，用冰壶加冰或泡沬箱加冰密封运输。 采样前三天内不要阴道内用药或冲洗，避免经期采样，但小量血液不会影响实验结果。 采样前24小时不要进行性生活 采样前不要进行醋酸/碘液涂抹 开盖、折断小刷子时勿大力震荡试管，以免试剂溅出影响检测或标本溅出造成污染 * 1，TCT保存液中DNA的提取方法：吸取1.5ml保存液至离心管中，13000rpm离心10min，弃上清，加1ml生理盐水充分悬浮沉淀，13000rpm离心10min，弃上清，加500μL无水乙醇充分悬浮沉淀，13000rpm10min，弃上清，置于干燥仪或烘箱中10～20min，充分干燥后加入50μL的裂解液 ，置于沸水浴中10 分钟 ，13000rpm离心10分钟，保留上清待用。 2，石蜡组织或石蜡切片中的DNA提取：把石蜡切片（5～10片）或石蜡组织转移到1.5ML离心管的管底中，加入50μL的DNA裂解液 ，置于沸水浴中10 分钟 ，13000rpm离心10分钟，离心后溶液分三层，上层是石蜡，中层是DNA裂解液，下层是破碎的细胞块，取中层的裂解液做PCR反应的模板。 3，疣体DNA提取 ：把疣体收集于1.5ML离心管中，用镊子将疣体尽量敲碎，然后加入50μL的裂解液沸水浴裂解10分钟，水浴后13000rpm离心10分钟，取上清做PCR反应模板。 4，分泌物太多的标本处理：可将分泌物和脱落细胞一起转移到离心管中，加入适量的（50～100）裂解液，沸水浴10min，水浴后13000rpm离心10分钟，取上清做PCR反应模板。 * 1，以5μL提取的DNA为模板加入PCR反应体系后上PCR仪 2，40个循环总共需要大约3小时。 3，50 ℃为UNG酶作用温度，我们的PCR体系采用了UTP-UNG酶防污染措施。 4，程序结束后可设一12 ℃的保存温度。 * 1，取15 mL 塑料离心管，放入标有患者编号的膜条（应在膜条的一角用铅笔标记），加入A液5~6 mL及所有（25μL）PCR产物，将盖拧紧，混匀PCR产物，再将离心管盖稍拧松，以避免加热时管盖爆开。将离心管放入沸水浴中加热10分钟（确保杂交液液面完全位于沸水浴液面之下），取出拧紧盖子，放入杂交箱51℃杂交1小时，但不超过4小时。 取50mL塑料管，加入40mL B液于杂交箱或水浴箱中进行预热至51℃。 2，取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中，于51℃轻摇洗涤15分钟（每管40mL 溶液，最多可同时洗涤4张膜）。 * 1，用A液配制1: 2000的POD溶液（单做两张膜只需4 μLPOD母液，配制成8mL使用液，做四张膜可用6 μLPOD母液，配制成12mL使用液），室温轻摇浸泡30分钟，弃去POD溶液。用A液室温轻摇洗两次，每次5分钟。用C液室温洗膜1-2分钟，同时配制显色液。将膜条浸泡于显色液中避光显色30分钟至1小时左右即可观察结果。 2，显色液（新鲜配制使用，按顺序加入以下溶液） C液　　　 　 19 mL TMB 1 mL 3% H2O2　　 　10μL 3，POD为链酶亲和素和过氧化物酶的结合物 4，TMB.四甲基联苯胺二盐酸，为POD反应的底物，对皮肤有刺激,且有致癌的可能. 人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测 湖北省肿瘤医院 雷旦生 人乳头瘤病毒（HPV） HPV(人类乳头瘤病毒)是以人类为唯一宿主的一种DNA病毒，现在已经明确，HPV与宫颈癌的发生高度相关。医学数据表明，60％～70％的女性感染过HPV病毒，99.8％的宫颈癌患者中可以检测到HPV，而HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。除此之外，98％以上的宫颈疾病患者体内也存在HPV。 目前有100余种型别HPV,约35种型别与生殖道感染有关，大约20种型别与癌症相关。 与宫颈癌相关的高危型HPV有13种：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58， 59，68。 与宫颈癌相关的低危型别有：6，11，40，42，43，44。 HPV基因分型检测的意义 ?宫颈病变及宫颈癌的筛查，通过分型检测对患者个体化评估，预测宫颈病变发生的风险度, 决定筛查的间隔、治疗方案的制定。 ?未明确诊断意义的非典型鳞状细胞和腺细胞（AS-CUS/AGUS）和宫颈上皮内低度病变（LSIL）的分流，提高诊断的可信度，降低漏疹风险。 ?宫颈病变治疗后的追综和随访 HPV阳性还可提示生殖器赘生物为尖锐湿疣的可能性