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流式细胞术免疫标记应用简介 2009-12-03 上次流式细胞术讲座内容(概述) 免疫标记技术 免疫标记技术(immunolabelling technique):是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂,标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 流式细胞术检测蛋白质分子:免疫荧光标记技术 流式细胞术免疫荧光标记的应用 检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势:在同一细胞上同时检测多种标志 血液系统各型细胞免疫标志 CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达,随着细胞成熟其表达呈进化性下降,继而消失。 CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一,并随一定的分化过程表达上调 最近发现CD90(Thy-1)是比CD34更早的干、祖细胞标志 结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志; CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向的祖细胞。 ??? T细胞及其亚群 T祖细胞(pro-T)的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中,CD7是最早出现的T细胞标志,且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞,细胞表面标志需经历一定的变化过程。 进入外周淋巴器官和血液,执行免疫功能 CD3+、CD4+、CD8-:T辅助/诱导细胞(Th/Ti),占T细胞总数的60%~70%; CD3+、CD4-、CD8+:T抑制/杀伤细胞(Ts/Tc) , 20%~30%; CD3+ CD4+ CD8+ : 1%~3%; CD3+ CD4- CD8-:1%~10%。 前三种表型细胞的TCR主要为TCRαβ,而CD4- CD8- T细胞主要表达TCRγδ,他们都执行细胞免疫功能。 CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原-2(LFA-2),表达于人95%T细胞、50%~70%胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞(LGL/NK)的表面。 CD3是T细胞表面抗原,表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血T细胞,是鉴定T细胞的重要标志,其胞浆和膜CD3是早期和普通型T细胞白血病的主要分型标记。 CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记,也是髓系白血病时最常见的伴随标记。CD45则是白细胞的共同标记抗体 CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表面,为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表达。 末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)和II类人类白细胞抗原(HLA-DR)的阳性表达对早期T细胞白血病的诊断有重要价值。 80%~90%和95%以上的NK细胞表达CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK细胞。 B细胞标记 B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞6个阶段。 (1)B祖细胞(pro-B):此期最早表达的B细胞特异性抗原是CD19,同时表达CD34、细胞核TdT、HLA-DR、CD40、CyCD22。 (2)前B细胞(pre-B):CD34和TdT消失,出现CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74,cμ+(胞浆IgM重链)。 (3)未成熟(早期)B细胞(immature B cell):CD9、CD10消失,出现 SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相继出现。 (4)成熟B细胞(mature B cell):SIgM和IgD同时表达,并出现CR、FcR和丝裂原受体,上述B细胞抗原继续存在。 (5)活化B细胞(activated B cell):成熟B细胞被抗原或丝裂原刺激后,成为活化B细胞,继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相关抗原如CD25、CD26、CD30、CD69、CD70、CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少,分泌型Ig逐渐增加。 (6)浆细胞(plasma cell):激活B细胞进一步分化成为产生抗体的浆细胞,这时获得PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原,CD85表达增加,CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原消失。CD79仍可存在于胞质中。 B细胞上的CD抗原分为: ①B细胞限制性(特异性)抗原: CD19、CD20、CD21、 CD22、
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