基因工程3概述.ppt

第二章 基因工程（3） 学习目标 1、掌握基因工程的原理和过程 2、了解基因工程在工农业、医药卫生等的应用 3、了解基因工程产品和食品的可能潜在风险 一、基因工程技术路线 DNA片段的取得（目的基因的分离和制备） DNA片段和载体的连接——重组体DNA 外源DNA片段引入受体细胞——基因克隆和基因文库 筛选与鉴定克隆子（目的基因） 目的基因表达 基因工程基本操作过程 （一）DNA片段（目的基因）的获得 目的基因含义： 指已被或欲被分离、改造、扩增和表达的特定基因或DNA片段，能编码某一产物或某一性状。 获得目的基因的方法： 内切酶切割分离法、构建基因组文库或cDNA文库分离法、PCR扩增法和人工合成法. （二）DNA片段和载体的连接——重组体DNA 1、载体的选择和构建 如质粒、温和噬菌体等，最常用的还是质粒载体（能在宿主内高拷贝复制，具有多个酶切位点及有标记性基因等）和它的人为构建高表达载体（加入了细菌和病毒的强启动子 选择：根据实验的目的来选择。如果要获得大量的高纯度的DNA片段，则选具有高拷贝的质粒载体：colE1、pMB1、pMB9等松弛型复制子质粒。 2、基因重组 含义：（也叫DNA体外重组）利用限制性内切酶和其他的一些酶类，切割、修饰载体DNA和目的基因，将两者连接起来，使目的基因插入可以自我复制的载体内，通过转入受体细胞，使这种外源性