基因工程表达许亚芳概述.ppt

8. 将上述混合物转移到预热到42℃的水浴锅中，热休克60秒 (不要摇动试管)，然后将试管迅速转移到冰浴，冷却5分钟。 * 重组子的筛选 重组子的筛选方法常用的方法： 抗生素筛选法 互补法 阳性质粒直接检测法 抗生素筛选法 菌株为某种抗生缺陷型， 而质粒上带有该抗性基因（如氨苄青霉素等）这样只有转化子才能在含该抗生素的培养基上长出。 * 9. 向管内加入800ul的LB培养液。然后37 ℃ 200rpm 摇床培养30分钟。 10. 取适量体积的转化细胞转移到含有适当抗生素的LB固体平板上，用灭过菌的玻璃棒涂布均匀。室温放置几分钟 11. 倒置平板于37 ℃培养12－16个小时。 互补法 许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列，此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段（146个氨基酸）。宿主细菌带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列。宿主细菌和质粒编码的片段各自都不具有酶活性，但它们可以通过片段互补的机制形成具有功能活性的β半乳糖苷酶分子。 Lac Z′基因编码的α肽链与失去了正常氨基端的β半乳糖苷酶突变体互补，这种现象称为α互补。 * 涂布棒的使用 1.使用前，浸入75%酒精中； 2.在酒