3、动物杂交法 许多基因由于进化过程中存在保守性而在人和其他物种中具有高度同源性,因此利用已知序列的其他物种的基因从构建的人基因组文库或cDNA文库中可以将目的基因调出。 生物技术制药 朱红艳 泰山学院生物与酿酒工程学院 4、功能克隆法 该法不适于在不知道基因相关功能信息的条件下有效地可隆新的基因。 可采用基因敲除技术、RNA干扰技术、酵母双杂交技术、高通量表达技术及流式细胞技术等手段,从基因水平、表达调控水平、蛋白质水平、细胞水平获得基因功能信息。 5、构建cDNA文库 通过表达序列标签(expressed sequence tags, EST)进行基因作图和基因组序列中编码序列的鉴别, EST能提供设计引物的足够信息,可以用PCR技术扩增基因组中特异片段,是一种有用的DNA位标。 6、差异显示技术的应用 用mRNA差异显示技术、减数PCR技术、差减杂交技术寻找新基因。 如通过正常组织和肿瘤组织某些基因和蛋白质的差异表达,寻找在肿瘤细胞中的高表达基因或沉默基因,从而推测其可能是癌基因或抑癌基因。 五、对已发现基因的改造 基因修饰技术和点突变技术进行基因新功能研究和确认; 蛋白质工程药物:更换活性蛋白关键氨基酸残基;增、删或调分子的某些肽段或结构域;嵌合性药物;修饰表达产物。 生物技术制药 朱红艳 泰山学院生物与酿酒工程学院 作 业 1、原核与真核生物mRNA的
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