基因工程制胰岛素(生工版)概述.ppt

* 八、发酵培养 * 摇瓶发酵结果 正交试验所得菌体经溶菌酶或/声破碎细胞后得到的包涵体SDS的结果见图。 * 八、发酵培养 * 摇瓶发酵结果 RRhPI-pQE40 E.coli M15 表达的外源蛋白(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原以包涵体形式存在,其分子大小约为13kD,由图可知,在哪种正交实验条件下包涵体的表达量较高。 * 八、发酵培养 * 摇瓶发酵结果 RRhPI-pQE40 E.coli M15在摇瓶中培养至对数生长中期,加入0.5mmol·L-1IPTG进行诱导,每隔1h取样,以SDS分析 RRhPI的表达情况(如图)。 * 八、发酵培养 * 摇瓶发酵结果 结果RRhPI-pQE40 E.coli M15在IPTG诱导4～5h时,富含包涵体的湿菌体(约24kD)收率较高,相应的目的蛋白表达量较高,继续诱导并未使湿菌体表达量有所提高。因此,诱导3.5～4h 既有利于富含包涵体的湿菌体及目的蛋白的表达,又可缩短发酵时间,简化生产工艺。 * 八、发酵培养 * 细胞的两种破碎方法 其一是溶菌酶/超声破碎细胞。发酵所得 RRhPI-pQE40 E.coli M15 湿菌体 ,悬浮于适量缓冲液 A(50mmol·L-1 Tris-HCl、0.5 mmol·L-1EDTA、50 mmol·L-1 NaCl、5% 甘油、0.1～0.5 mmol·L-1 DTT、pH7.9