基因研究技术之文库构建概述.ppt

植物转基因转化技术 原生质体转化法 基因枪法 农杆菌介导法 电穿孔法 花粉管通道法 转化transformation：重组质粒DNA导入感受态细胞。G－受体细胞，产生感受态因子，将双链DNA吸附到细胞壁上，单链DNA插入细胞内(另一条链降解)，被特异性蛋白包裹保护而不被降解，单链DNA复制产生新转化子； 转染transfection ：将重组噬菌体DNA直接引入受体细胞的过程。与转化无本质差别 转导transduction ：感染，重组噬菌体DNA被包装成为有感染力的噬菌体颗粒，将重组DNA导入受体细胞中。比转染的克隆形成效率要高出几个数量级。 氯化钙制备新鲜的感受态细胞转化法 适用于大多数大肠杆菌菌株，转化效率高、简单快速、重复性好 成批制备感受态细菌，使每微克质粒DNA产生将近107个转化菌落。 可以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要 制备的感受态细胞可贮存于-70℃ ， 贮存时间过长会影响转化效率。 提高转化频率的措施 碱性磷酸酶处理法：阻止不带有DNA插入片段的载体分子发生自身再环化作用，破坏了其转化功能。 环丝氨酸富集法 使带有原来质粒载体的细菌致死 抑制空载体分子形成转化子。该法是依据外源DNA片段的插入作用，导致质粒的某种基因失活。四环素抗性基因tetr 高压电穿孔转化法(电转化法) 适用于真核细胞和