陈洪惠-2015-6-4修改版技术分析.doc

学 士 学 位 论 文 双水相萃取蚓激酶的初步研究 姓 名： 陈洪惠 学 号： 201107140402 指导教师： 王 飞 学 院： 生命科学学院 专 业： 制药工程 完成日期： 2015年6月5日 学 士 学 位 论 文 双水相萃取蚓激酶的初步研究 姓 名： 陈洪惠 学 号： 201107140402 指导教师： 王 飞 学 院： 生命科学学院 专 业： 制药工程 完成日期： 2015年6月5日 摘 要 为弥补蚓激酶现有提取方法的不足，本实验采用聚乙二醇-硫酸铵组成的双水相体系对蚓激酶进行分离纯化，并运用TAME底物法测定其效价。以蚓激酶的效价为考察指标，探讨聚乙二醇的分子量、聚乙二醇的质量分数、硫酸铵的质量分数对双水相萃取蚓激酶的影响，并通过正交试验进一步优化萃取条件。经实验，聚乙二醇质量分数对蚓激酶的萃取影响最大，在聚乙二醇分子量为6000、聚乙二醇质量分数为16%、硫酸铵质量分数为18%时组成的双水相体系，对所分离得到的蚓激酶效价较高，提取的蚓激酶活力达12.23U/mg。结果表明，该双水相体系用于蚓激酶分离纯化具有良好的选择性，而且保持了较高的活性。 关键词：双水相；萃取；蚓激酶；正交试验 Abstract In order to remedy the deficiency of Lumbrokinase extraction method,separation of Lumbrokinase directly from earthworn homogenate in aqueous two-phase systems(ATPS)of polyethylene glycol-ammonium sulfate was studied.The effects of polyethylene glycol molecular weight,(NH4)2SO4 concentration on the extraction were investigated in terms of titer.Orthogonal experiment was used to further analyze and optimize the separation of Lumbrokinase.The results indicated that the control of polyethylene glycol molecular weight had the greatest influence.The polyethylene glycol molecular weight was6000, polyethylene glycol concentration was 16%, 18% sodium sulfate concentration of aqueous two-phase system can obtain high Lumbrokinase titer.The separation was successful with the Lumbrokinase activity of 12.23U/mg.Test showed that polyethylene glycol-ammonium sulfate aqueous two-phase system for separation Lumbrokinase from the earthworm provides a new extraction method, rsults showed that the aqueous water phase system used in Lumbrokinase purification has good selectivity, and kept high activity. Key Words:Aqueous two phase; Extraction;Lumbrokinase; Orthogonal experiment 目 录 第1章 引言 1 第2章 材料与仪器 2 2.1 材料与试剂 2 2.2 试剂的配制 2 2.3 实验仪器 3 第3章 实验方法 4 3.1 蚓激酶粗提液的制备 4 3.2 双水相萃取蚓激酶的流程 4 3.3 蚓激酶效价测定 4 3.3.1 甲醇标准曲线的绘制 4 3.3.2 蚓激酶样品效价测定 4 3.4 双水相萃取单因素