分子生物学课件MB-9 expression regulation in eukaryote1.ppt

* (isoschizomers)例如HpaⅡ识别并切割未甲基化的CCGG（），而MspⅠ识别无论是否甲基化的CCGG（或），切别的片段分别进行电泳（图18-43）。HpaⅡ只能切非甲基化的CCGG，所以只有一个切点，产生两条带；而MspⅠ可以切甲基化和未甲基化的CCGG，因此有两个切点，产生3条电泳带，比较带的长度就就不难确定甲基化位点的位置了。同裂酶是来源于不同物种但能识别相同DNA序列且切割方式相同的酶 * 在一些不表达的基因中，启动区的甲基化程度很高，而处于活化状态的基因则甲基化程度较低。现以卵黄原蛋白Ⅱ基因为例来说明这个问题。卵黄蛋白并非在卵母细胞或受精卵中合成的，而是在成熟的雌性动物肝中先合成卵黄蛋白原（vetellogenin），然后分泌到血液中，再运送到卵巢。发育中的卵（卵母细胞）选择性地将卵巢中的卵黄蛋白原加以吸取，再切割，装配成卵黄蛋白。雄性动物也有卵黄蛋白原基因，但不能表达。这是因为缺乏雌激素之故。其分子机制仍和甲基化有关。鸡的卵黄蛋白原基因的5′调节区有4个CpG位点（图18-43），C，D位点是雌二酮受体蛋白复合物的结合部位。在雌激素处理后，在-612（C）的HpaⅡ位点处于低甲基化。在红细胞DNA的上面一股链上4个位点全部甲基化，下股链只有50%甲基化，但经雌二酮处理后数小时内甲基化的形式发生急剧变化，上股链中4个位点全部去甲基化，与卵黄蛋白原mRNA相吻合，而另一股键上4个位点滞后24小时才去甲基化，这就是在肝细胞中卵黄蛋白原基因中的5′端调节区有部分半甲基化位点，而雌激素的处理只引起其中一条链迅速地去甲基化，另一条链暂时仍保持本甲基化状态，所以此基因在雄体中处于甲基化状态，没有活性。 酶对CpG位点的甲基化是有选择的，例如小鼠β-珠蛋白基因5′侧翼有5个CpG位点，其中4个较集中。用纯化的DNA甲基转移酶在体外处理这段序列，结果各位点的甲基化程度各不相同，有的不发生甲基化，有的甲基化不明显，有的稍有甲基化，有的大量甲基化，无论是诱导的还是未诱导的细胞；无论是纯化酶，还是粗制酶都一样。表明还有其它的选择因素存在。 甲基化可使基因失活，去甲基化又可使基因恢复活性。5-氮胞苷（图18-45）没有游离的5′-H，因而不能接受甲基，若将它掺入DNA取代胞苷是可以改变基因的甲基化状态，而达到去甲基化。 * 网上图,单独的图片,在资料中 * DNA序列序列没有变化，但经过化学修饰后调节基因表达，化学修饰可以稳定遗传的，即来自母本的基因甲基化后代仍被甲基化 * 单独的图片,在资料中 * 无源自母亲的7号染色体。所以，此病可能是由于源自母亲等位基因不能表达，而全无母亲等位基因表达产物所致。 * DNA甲基化与X染色体失活 ? 雌性胎生哺乳类动物细胞中两条X染色体之一在发育早期随机失活，以确保其与只有一条X染色体的雄性个体内X染色体基因的剂量相同。一旦发生X染色体失活，使该细胞有丝分裂所产生的后代都保持同一条X染色体失活。 ? 科学家发现，在X染色体上存在一个与X染色体失活有密切联系的核心部位称为X染色体失活中心（X-chromosome inactivation center，Xic），定位在Xq13区（正好是Barr氏小体浓缩部位）。 ? Xi-specific transcript (Xist)基因只在失活的X染色体上表达，其产物是一功能性RNA，没有ORF却含有大量的终止密码子。实验证明，Xist RNA分子能可能与Xic位点相互作用，引起后者构象变化，易于结合各种蛋白因子，最终导致X染色体失活。 * 印记:来源于父母本的一对等位基因表达不同。如源于父本的IGF-Ⅱ (胰岛素样生长因子Ⅱ)基因可表达，而源于母本的则不能表达。此是由于卵母细胞中的IGF-Ⅱ 已被甲基化，而精子中的IGF-Ⅱ未被甲基化，所以这一对等位基因在合子中表现不同。 目前在人类和鼠身上已辨明了20种印迹基因。大多数人类的印迹基因集中在三个簇中。在每个基因簇上都存在着特异的印记盒 (imprinting box)，能顺式调节印迹基因的亲本特异性表达，这些位点表现出亲本特异性的甲基化作用和去甲基化作用。 * 反式作用元件（trans-acting element）：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。 * 启动它所调节的基因的转录反式作用因子的转录调控结构域 * 存在于多种真核转录因子 具多个锌指结构 锌指这个名称来源于它的结构，它由一小组保守的氨基酸和锌离子结合，在蛋白质中形成了相对独立的功能域，像一根根手指伸向DNA的大沟。两种类型的DNA结合蛋白具有这种结构，一类是锌指蛋白，另一类是甾类受体。典型的锌指蛋白有一组锌指（图18-36-b），单个的锌指的保守序列是：Cys-X