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喜树碱及其衍生物提取工艺进展研究 摘要：喜树碱类药物是用于临床的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，是继紫杉醇后又一个很有发展前途的抗癌药，已成为目前抗癌药物中研究的热点。喜树碱(CPT)是一种细胞毒性喹啉生物碱,可以抑制DNA酶拓扑异构酶I。1966年，M.E. Wall和M.C. Wani 等从喜树植物中分离出喜树碱并认为其是一种天然的抗癌药物。实验室提取喜树碱及其衍生物的方法多为乙醇为溶剂，使用微波法、浸提法、超声波法或匀浆提取法从树木的叶子中提取喜树碱及其衍生物。有研究通过正交试验对提取温度、提取时间以及匀浆时间对提取效率的影响进行了分析。笔者将从简单综述以上多种喜树碱及其提取工艺，并简述各种工艺操作的优缺点。 关键字：喜树碱；提取工艺；研究进展 前言： 喜树碱(Camptothecin，CPT) 喜树为山茱萸目珙桐旱莲属植物。1966年，自M.E. Wall和M.C. Wani 等从喜树植物中分离出喜树碱以来，国内外对喜树碱和10一羟基喜树碱的提取研究已有许多报导。1976年中国化学家高怡生等合成消旋喜树碱成功。喜树碱是从产于中国的喜树(喜树，幸福树)树皮和分离出来，早期为传统中医疗法治疗癌症的方法。喜树碱在初步临床试验有显著的抗癌特性、溶解度低以及含有高度的药物不良反应特性药用化学家进而利用这些特性开发出了多样的合成喜树碱和各种衍生品，以增加良好的效果。现今已有两个喜树碱的类似物批准，并为癌症进行化疗，如拓扑替康和伊立替康。 1．2．3喜树碱衍生物的测定 1)高效液相色谱条件。色谱柱：XTerra RPl8柱(5μm，4.6 mm×250 mm)：流动相:体积比20:80的乙腈水混合液；入射波长：550 nm；激发波长：363 mm；流速：1 mL／min；进样量：lOμL；柱温：30℃。 2)标准曲线的制备。精确称取11．1 mg 10一羟基喜树碱和10．3 mg喜树碱标准样品于50 mL的容量瓶中,用无水乙醇溶解,定容至刻度线。将上述标准样品按梯度稀释，进样量10μL，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归,得标准曲线方程：喜树碱Y1=(1E+06)X+241384 r=0.9999；lO--羟基喜树碱Y2=(9E+06)X+553 466，r=1.0000。喜树碱和10一羟基喜树碱分别在0．103～51．500和0.111。11.100μg／mL时，浓度与峰面积具有良好的线性关系。 按照上述喜树碱及其衍生物标准品的检测条件，分别测定1．2．1和1．2．2所得提取液中喜树碱和10一羟基喜树碱的含量．并计算喜树碱和10--羟基喜树碱的提取率。 2 结果与分析 2．1 温度对浸提法提取喜树碱及其衍生物提取效率的影响 浸提温度对喜树碱及其衍生物的提取率有一定影响(表2)，70℃过夜浸提．喜树碱提取率最高．但此时10--羟基喜树碱的提取率低于50和60℃时的提取率。超声处理能在短时间内提高浸提的效率。70℃时浸提30min结合超声处理30min．10--羟基喜树碱的提取率与50和60℃时过夜浸提的提取率相同。喜树碱的提取率略低于过夜浸提时所得提取率相同，说明超声处理能有效缩短浸提时间。 2.2 超声时间对喜树碱和10--羟基喜树碱提取率的影响 超声提取时间对喜树碱和10--羟基喜树碱提取率的影响不同(表3)。随着超声时间的延长，10--羟基喜树碱的提取效率在45 min内基本没变化。但当延长至60 min时，其提取率为超声45 min时提取率的2倍多。喜树碱提取率则随超声时间的延长呈先上升后下降的趋势。超声时间为30 min时提取率最大。 2．3匀浆时间对喜树碱及其衍生物碱提取率的影响 匀浆时间长短对10一羟基喜树碱提取率的影响不大，而喜树碱的提取率随着匀浆时间的延长而增加(表4)。 2．4正交试验结果 根据正交试验结果。各因素对10一羟基喜树碱提取率的影响顺序为：提取温度、匀浆时间、超声波时间，对喜树碱提取率的影响顺序为：提取温度、超声波时间、匀浆时间(表5)。提取10--羟基喜树碱的最优方案为A3B2C2；即匀浆12min，60℃浸提30min，超声波处理30min;提取喜树碱的最优方案为A3B2C1,即匀浆提取12min，60℃水浴30min，超声波处理15 min,喜树碱的提取率可达O.33845％,明显高于单独使用4种方法中任何1种所得的提取率。 3.小结 通过单因素试验和正交试验优化喜树碱及其衍生物的提取方案,结果显示,单一提取方法中,浸提法过夜提取喜树碱及其衍生物的提取率均达到最高，但该法耗时长、耗能大。正交试验结果表明不同因素对喜树碱及其衍生物影响大小不同。提取温度对其提取率都很重要。而匀浆时间对喜树碱和10--羟基喜树碱提取影响略有差异。可能与2种化合物