动物模型建立.docVIP

需要准备的东西： 高压细菌冲洗液，可以是幽门螺杆菌液体培养基或是PBS缓冲液。 将现有的针高压。 另外，观察SS1标准株的细菌长势，将部分细菌传代，以保证周二细菌长势良好。依此类推，保证细菌在周四和周六长势良好。 先用一块弃用的平板练习如何调整细菌浓度，避免到时手忙脚乱。（先将细菌全部刮下，溶到脑心浸液中，混匀，测OD660,当数值为1时，即浓度108/ml，再将此离心，浓缩10倍，即为浓度109/ml），这些都需要在超净台中操作，但是测OD值时可以吸取菌液稀释后测浓度，然后换算回来就行了。） 1． 观察细菌的长势，建立 SS1标准株，同时选取较好一块平板作液体培养，同时注意观察条件之间的不同，找出上次液体培养失败的原因。 2．周二 需要至少5块平板，同时多做一块作备用平板。 3． 选取细菌长势比较好的细菌，溶在液体培养基中。总量为8×1ml×3次=24ml(总量为30ml，考虑到灌胃时的损失)（然后调整浓度为108/ml或109/ml）。 选取无污染的细菌平板用液体冲下来。 最初时用少量的液体冲洗，以便调整浓度。/或者离心收取细菌（rpm:5000,10min），再调整细菌浓度。 测OD值。当OD660=1，浓度108/ml。将细菌浓度调整至109/ml 4． 分别在10，12，14号灌胃。 选取57BL/6(或者BAB/C)雌性小鼠，6－8周龄，18－20克，S.P.F级。 灌胃总量为108细菌量×4只，109细菌量×4只,另外2只作对照，灌无菌细菌冲洗液。 每次灌胃以前灌胃针用酒精消毒（也可能这面可以提供灌胃针，这需要再去问问）。 灌胃以前选取1ml的无菌注射器，以便准确度量。 5． 间隔2周 6． 处死小鼠（断颈处死） 7．Hp感染检测 将试验鼠胃沿纵向切开，纵向切成同样大小的3份，1份直接快速尿素酶试验，1份放入无菌生理盐水中，用于细菌培养，1份置于10％福尔马林中固定，用于病理组织学（Giemsa和HE染色）检测。 快速尿素酶试验：将其中1份胃粘膜放入快速尿素酶检测试剂中，37度放置24h，试剂颜色变红表示阳性。 培养：将1份胃粘膜粘膜朝下，均匀涂布于血平板上，37度培养5－7天，经涂片革兰染色，尿素酶，触酶，氧化酶试验确定是否是Hp，再将阳性菌落转种于另一平板上，培养3－5天，再次观察菌落形态及生化反应，形态典型及生化反应均为阳性者定为Hp阳性。 病理组织学：Giesma染色确定Hp定植程度，HE染色确定炎症程度。 HP定值标准判定：高倍镜下观察10个视野胃小凹的Hp定植： 0＝无HP 1＝胃小凹内有1－2条HP，但非每个小凹内都有HP存在 2＝多数胃小凹内有3－10条HP 3＝几乎所有胃小凹内均有成堆的HP 胃粘膜病理组织学标准： 高倍镜下观察10个视野慢性炎症细胞（淋巴细胞，浆细胞）和中性粒细胞浸润多少 0＝偶尔见炎症细胞 1＝散在炎症细胞 2＝有较多炎症细胞 3＝有大量炎症细胞